微滴数字PCR低丰度靶标检测

检测项目

肿瘤循环游离DNA突变检测：利用ddPCR超高灵敏度，检测血液中极低浓度的肿瘤特异性基因突变，用于癌症早期筛查、疗效监测与复发预警。

病原微生物微量核酸检测：针对病毒、细菌等病原体的低载量感染，进行绝对定量分析，适用于早期感染诊断和抗病毒治疗监测。

转基因成分定量分析：精准定量食品、饲料中微量的转基因成分，满足法规对标识阈值以下含量的精确定量需求。

拷贝数变异分析：检测基因组中细微的拷贝数变化，尤其适用于癌症基因组中低比例细胞的CNV鉴定。

单细胞基因表达分析：对单个细胞中低丰度的mRNA进行绝对定量，用于研究细胞异质性和稀有细胞群。

甲基化等位基因频率检测：定量分析DNA样本中低频率的甲基化等位基因，应用于表观遗传学研究和癌症生物标志物发现。

移植后嵌合体监测：高灵敏度检测造血干细胞移植后供体细胞或受体残留病变细胞的微量嵌合状态。

罕见等位基因突变筛查：在复杂背景中鉴定频率低于0.1%的稀有突变，用于遗传病携带者筛查和肿瘤耐药突变监测。

病毒载体拷贝数确定：在基因治疗中，精确测定整合到宿主基因组中的病毒载体拷贝数，确保治疗安全性与有效性。

微生物组低丰度物种鉴定：在复杂微生物群落中，对相对丰度极低的菌种进行特异性识别和绝对定量。

检测范围

极低浓度核酸样本：可检测浓度低至每微升0.1拷贝的靶核酸分子，适用于模板量极其有限的珍贵样本。

复杂背景中的稀有突变：能够在高达100，000倍野生型背景中，特异性检测出突变等位基因频率低至0.001%的变异。

微量细胞游离DNA：针对血浆、脑脊液等体液中的痕量循环游离DNA进行检测，最低可分析几纳克的输入量。

单分子级别定量：检测范围覆盖单分子水平，实现从0到数百万拷贝的宽广动态范围内的绝对定量，无需标准曲线。

多重靶标同步检测：通过多色荧光通道，可在单次反应中对2-4个低丰度靶标进行同步、独立的绝对定量分析。

高抑制剂耐受性样本：对血液、土壤、植物提取物等样本中常见的PCR抑制剂具有较高的耐受能力，减少纯化损失。

低至单拷贝的病毒载量：精确监测艾滋病、乙肝等慢性感染患者体内接近检测下限的极低病毒载量，评估“功能性治愈”。

胚胎植入前遗传学筛查：对单个或少数胚胎细胞进行染色体非整倍体和单基因病检测，要求极高的检测灵敏度与准确性。

环境痕量污染物监测：应用于环境样本中特定功能基因或指示微生物的微量检测，评估环境污染程度。

药物代谢相关基因分型：检测药物代谢酶基因的稀有变异，为个体化用药提供精准的基因型信息。

检测方法

微滴生成：将含有核酸模板的PCR反应体系通过微滴生成仪，分割成数万个纳升级的独立油包水微滴，实现物理分隔。

终点PCR扩增：对生成的微滴进行传统的终点PCR热循环扩增，每个微滴作为一个独立的反应单元。

荧光信号读取：扩增完成后，使用微滴分析仪逐颗检测每个微滴的荧光信号，有靶标分子的微滴产生强荧光（阳性），反之则为阴性。

泊松分布统计：基于阳性微滴的比例，应用泊松分布统计模型进行校正，计算出原始样本中靶标分子的绝对拷贝数浓度。

绝对定量无需标曲：该方法直接给出拷贝数/微升的绝对浓度，无需依赖标准曲线，减少了因标准品不准带来的误差。

阈值设定与阴阳性判读：通过荧光振幅图设定阈值，JianCe区分阳性和阴性微滴群体，实现数字化（0/1）判读。

多重检测探针设计：针对不同靶标设计带有特异荧光标记（如FAM， HEX， VIC）的探针，在同一反应中实现多靶标检测。

抑制剂的耐受性处理：微滴分隔效应稀释了抑制剂在单个反应单元中的浓度，从而提升了方法对复杂样本中抑制剂的耐受性。

低丰度靶标富集策略：通过增加反应体系体积以分析更多样本分子，或进行预扩增等策略，进一步提高对极低丰度靶标的检出能力。

数据分析与不确定度计算：专用软件自动计算靶标浓度及其95%置信区间，提供测量结果的可靠性评估。

检测仪器设备

微滴生成仪：核心设备之一，利用微流控技术将样本溶液均匀地分割成数万个纳升微滴，确保单分子分散。

微滴数字PCR分析仪：核心检测设备，采用流式细胞或CCD成像原理，对热循环后的微滴进行逐颗荧光检测与计数。

热循环仪：用于对生成微滴后的96孔板进行PCR扩增，需要具备良好的温度均一性和控温精度。

微滴读取芯片或卡盒：部分系统采用一次性的微流控芯片或卡盒来生成和转移微滴，简化操作并防止交叉污染。

自动化液体处理工作站：用于高通量应用，实现反应体系配置、样本添加等步骤的自动化，提高通量和重复性。

荧光显微镜成像系统：某些基于芯片的ddPCR系统使用高分辨率荧光显微镜和CCD相机对微滴阵列进行成像分析。

专用分析软件：配套的数据分析软件，用于阈值设定、阴阳性微滴分类、浓度计算、置信区间分析和结果可视化。

微滴破碎与回收装置：用于在检测完成后破碎微滴油膜，以便回收特定微滴中的产物进行下游测序等分析。

超纯水制备系统：提供无核酸酶、无污染的超纯水，是配制所有试剂的基础，对低丰度检测至关重要。

精密移液器与低吸附耗材：包括高精度移液器、无核酸酶的低吸附吸头与反应管，以最大程度减少样本损失和交叉污染。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件