核酸电泳纯度验证

检测项目

基因组DNA完整性：评估DNA分子是否发生随机断裂，通常通过观察琼脂糖凝胶上主条带的JianCe度与拖尾现象来判断。

RNA完整性：通过非变性琼脂糖凝胶电泳观察真核生物总RNA的28S和18S rRNA条带亮度比（通常约为2:1）及有无降解拖尾。

质粒DNA构型：区分质粒DNA的超螺旋闭环、开环和线性三种构型，它们在电泳中的迁移速率不同。

PCR产物特异性：验证PCR扩增产物是否为单一、大小正确的目标条带，排除引物二聚体或非特异性扩增。

核酸样品纯度：通过观察凝胶中是否有蛋白质、多糖或有机溶剂等污染物导致的异常条带或荧光背景来判断。

DNA片段大小：通过与已知大小的DNA分子量标准（Marker）对比，估算待测核酸片段的精确或近似长度。

RNA降解程度：通过观察甲醛变性胶或专用RNA电泳胶中rRNA条带的模糊程度和smear（涂抹）状况来定量评估。

核酸浓度粗略估计：通过比较样品条带与已知浓度标准品条带的荧光强度，对核酸浓度进行半定量分析。

限制性酶切效率：验证DNA是否被限制性内切酶完全消化，通过观察底物条带是否完全转化为预期大小的片段。

核酸提取质量：综合评估核酸提取过程的整体效果，是判断提取试剂盒或方法优劣的直接依据。

检测范围

基因组DNA提取物：适用于从动物组织、植物材料、微生物培养物等来源提取的基因组DNA的质量控制。

总RNA及mRNA样品：用于评估从各种生物样本中提取的总RNA或经过纯化的mRNA的完整性与纯度。

质粒与载体DNA：适用于克隆实验中所用的各种质粒、粘粒、BAC等载体DNA的构型分析与纯度验证。

PCR与qPCR产物：用于常规PCR、荧光定量PCR、逆转录PCR等扩增产物的特异性与大小确认。

限制性酶切产物：适用于酶切消化后DNA片段的分离与鉴定，常用于克隆策略验证。

DNA文库构建中间体：在下一代测序（NGS）文库制备过程中，对末端修复、加A、连接接头等各步骤产物进行质检。

体外转录产物：用于验证通过体外转录系统合成的RNA（如siRNA、反义RNA、RNA探针）的大小和完整性。

核酸纯化回收产物：对从凝胶中或使用试剂盒回收的特定核酸片段进行回收效率和纯度验证。

酶促反应产物：适用于连接、标记、补平、磷酸化等核酸修饰酶反应产物的分析。

合成寡核苷酸：通过高浓度变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）验证合成引物或探针的长度与纯度。

检测方法

琼脂糖凝胶电泳：最常用的方法，利用琼脂糖网状结构分离不同大小的核酸片段，操作简便快捷。

聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）：分辨率极高，适用于分离小片段DNA、寡核苷酸及蛋白质，常用于精确分析。

变性琼脂糖凝胶电泳：在凝胶和电泳缓冲中加入甲醛或乙二醛，使RNA保持线性状态，用于精确分析RNA。

脉冲场凝胶电泳：通过交替变换电场方向分离超大片段DNA（通常大于50 kb），用于基因组图谱分析。

毛细管电泳：自动化、高灵敏度的定量方法，可提供精确的片段大小、浓度和纯度信息，但设备昂贵。

非变性（天然）凝胶电泳：保持核酸天然构象，用于研究核酸-蛋白质相互作用或特定构象的核酸。

梯度凝胶电泳：使用浓度梯度凝胶（如4%-20%），可在同一块胶上获得更宽分子量范围的JianCe分离。

原位凝胶染色法：在制胶时或电泳后将凝胶浸入溴化乙锭（EB）、GelRed等荧光染料中进行染色观察。

电泳后染色法：电泳完成后将凝胶置于含有安全染料的溶液中染色，减少染料对电泳行为的潜在影响。

紫外或蓝光成像分析：使用凝胶成像系统在特定波长光源下激发荧光染料，捕获图像并利用软件进行分析。

检测仪器设备

电泳仪电源：提供稳定电压和电流，驱动核酸分子在凝胶基质中定向迁移的核心设备。

水平电泳槽：盛放缓冲液和凝胶的平台，是进行琼脂糖凝胶电泳的主要装置。

垂直电泳槽：用于聚丙烯酰胺凝胶电泳，凝胶在两块玻璃板间垂直放置。

凝胶成像系统：整合紫外或蓝光透射仪、滤光片和CCD相机，用于拍摄和记录凝胶荧光图像。

微波炉或加热板：用于加热融化琼脂糖粉末，以制备均匀的琼脂糖凝胶。

制胶器与梳子：用于浇铸凝胶并形成加样孔，梳子的齿数和齿厚决定了加样孔的数量和体积。

微量移液器及吸头：用于精确量取和点样核酸样品及分子量标准品。

紫外分光光度计/Nanodrop：虽非电泳直接设备，但常与之联用，预先测定核酸的浓度与A260/A280纯度比值。

恒温水浴锅或金属浴：用于加热DNA样品或上样缓冲液，确保样品在点样前充分变性或混匀。

分析软件：如ImageJ、Quantity One、Gel-Pro Analyzer等，用于对凝胶图像进行条带定量、分子量分析和密度扫描。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件