代谢稳定性肝微粒体

检测项目

固有清除率测定：通过测定化合物在肝微粒体孵育体系中的消失速率，计算其固有清除率，是评估代谢稳定性的核心指标。

半衰期估算：根据化合物浓度随时间下降的曲线，计算其在肝微粒体体系中的代谢半衰期，直观反映代谢快慢。

代谢产物鉴定：利用高分辨质谱等技术，对孵育后产生的代谢产物进行结构鉴定，明确主要代谢途径。

酶动力学参数测定：测定代谢反应的米氏常数和最大反应速率，用于深入理解代谢酶的催化效率和底物亲和力。

CYP450酶亚型贡献度分析：使用特异性化学抑制剂或重组单酶，确定负责化合物代谢的主要CYP450酶亚型及其相对贡献。

NADPH依赖性评估：通过设置不含辅因子NADPH的对照组，确认代谢反应是否依赖于细胞色素P450等氧化酶系统。

种属差异比较：平行使用人、大鼠、犬、猴等多种属肝微粒体进行实验，评估代谢稳定性和代谢途径的种属差异。

时间依赖性抑制筛选：通过预孵育实验，检测化合物是否对CYP450酶产生时间依赖性抑制，这是药物-药物相互作用风险评估的关键。

非特异性结合测定：评估化合物在孵育体系中与肝微粒体蛋白、脂质等的非特异性结合，用于校正表观清除率数据。

热稳定性测试：考察肝微粒体在储存或处理过程中的酶活性保持情况，确保实验数据的可靠性和重现性。

检测范围

新化学实体：药物发现阶段的全新小分子化合物，需早期评估其代谢稳定性以指导结构优化。

候选药物：进入临床前开发的优选化合物，需进行全面代谢稳定性及酶表型研究。

天然产物活性成分：从中药或天然产物中提取的单体成分，研究其体外代谢特性以支持新药开发。

前药：评估前药在肝微粒体中转化为活性药物的速率和效率。

手性药物：分别研究其对映异构体在肝微粒体中的代谢差异，即立体选择性代谢。

药物代谢物：对已在体内发现的代谢产物进行稳定性研究，评估其是否会发生二次代谢。

农药与化学品：评估农业或工业化学品的体外代谢命运，用于毒理学和环境风险评估。

保健品成分：对功能性食品或保健品中的功效成分进行代谢初步研究。

药物相互作用候选物：筛选可能作为CYP450酶抑制剂或诱导剂的化合物。

跨膜蛋白调节剂：研究针对转运体或非CYP450靶点的化合物是否被肝脏药物代谢酶共同代谢。

检测方法

底物 depletion 法：最常用方法，直接监测原型药物浓度随时间下降的速率，用于快速评估固有清除率。

代谢产物生成法：针对已知主要代谢途径，通过监测特定代谢产物生成的速率来评估代谢稳定性。

LC-MS/MS 定量分析：使用液相色谱-串联质谱作为主流分析手段，实现高灵敏度、高选择性的定量分析。

高分辨质谱分析：利用Q-TOF等高分辨质谱进行非靶向扫描，用于未知代谢产物的鉴定与结构解析。

放射性标记示踪法：使用放射性同位素标记的化合物，可全面追踪质量平衡和所有代谢产物。

荧光/化学发光底物法：使用特异性荧光或化学发光探针底物进行高通量筛选，间接评估对特定CYP酶的抑制或诱导作用。

Cocktail 探针底物法：将多种CYP酶的特异性探针底物置于同一孵育体系，一次性评估化合物对多个CYP亚型的抑制潜力。

UPLC 联用技术：采用超高效液相色谱快速分离代谢物，缩短分析时间并提高分辨率。

自动液体处理工作站操作：使用自动化工作站进行孵育体系的配制、取样和淬灭，提高通量和重现性。

数据分析软件拟合：使用正规药代动力学软件对浓度-时间数据进行非线性拟合，计算清除率、半衰期等参数。

检测仪器设备

恒温振荡孵育器：提供精确控制的温度和振荡环境，用于肝微粒体与化合物的孵育反应。

液相色谱-串联质谱仪：核心分析设备，用于复杂生物样品中化合物及其代谢物的高灵敏度定量与定性分析。

高分辨质谱仪：如飞行时间或轨道阱质谱，用于精确质量数测定和代谢产物的结构鉴定。

高效/超高效液相色谱仪：用于在质谱检测前对样品中的分析物进行色谱分离。

自动液体处理工作站：实现微升级别的液体精准移液、稀释和分配，用于高通量实验的样本前处理。

离心浓缩仪：用于孵育后样品的快速淬灭、蛋白沉淀及上清液的浓缩或干燥。

低温高速离心机：用于分离孵育后的微粒体蛋白沉淀与上清液，以终止反应并制备分析样本。

精密分析天平：精确称量化合物标准品，用于配制储备液和工作液。

pH计：精确测量和调节孵育缓冲液的pH值，确保反应体系处于生理相关条件。

-80°C 超低温冰箱：用于长期保存肝微粒体、标准品及不稳定样品，保持生物活性和化合物稳定性。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件