磷酸化蛋白芯片高通量测试

检测项目

激酶底物磷酸化谱分析：系统性检测特定激酶对成百上千种底物蛋白的磷酸化活性与偏好性。

信号通路关键节点磷酸化检测：针对MAPK、PI3K/Akt、JAK-STAT等核心通路中关键蛋白的磷酸化状态进行平行分析。

受体酪氨酸激酶（RTK）磷酸化筛查：高通量检测多种RTK的自磷酸化水平及其下游适配蛋白的招募情况。

细胞凋亡相关蛋白磷酸化检测：同步分析Caspases、Bcl-2家族蛋白等多种凋亡调节因子的磷酸化修饰变化。

细胞周期调控蛋白磷酸化分析：检测Cyclin、CDK、Rb等周期蛋白及其调节因子的磷酸化动态。

表观遗传修饰相关蛋白磷酸化检测：研究组蛋白修饰酶、DNA甲基转移酶等表观调控因子的磷酸化状态。

免疫应答相关信号磷酸化 profiling：分析T细胞受体、B细胞受体及炎症通路中信号分子的磷酸化事件。

神经退行性疾病相关蛋白磷酸化筛查：针对Tau、α-synuclein等蛋白的病理性磷酸化位点进行集JianCe测。

药物或化合物对磷酸化网络的扰动评估：评估小分子抑制剂、激动剂等处理对全局磷酸化信号的影响。

疾病生物标志物的磷酸化特征谱发现：通过对比正常与疾病样本，筛选具有诊断或预后价值的特异性磷酸化蛋白。

检测范围

人类蛋白质组磷酸化位点：覆盖经文献验证的数千个人类蛋白质的特定丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸磷酸化位点。

保守信号转导通路：涵盖进化上保守的，如生长因子响应、应激反应、代谢调节等核心信号通路网络。

癌症相关信号网络：重点包含在多种癌症中异常激活的致癌信号通路和肿瘤抑制通路中的磷酸化事件。

免疫与炎症信号轴：覆盖从模式识别受体到细胞因子信号传导的广泛免疫相关磷酸化蛋白。

细胞粘附与骨架调控蛋白：包括整合素、钙粘素下游及肌动蛋白调节相关蛋白的磷酸化修饰。

DNA损伤应答通路：涵盖ATM/ATR、Chk1/Chk2等关键DNA损伤感应器及效应器的磷酸化状态。

GPCR下游信号分子：检测G蛋白偶联受体激活后所涉及的激酶（如PKA， PKC）及下游靶标。

干细胞多能性维持相关通路：包含Wnt， Notch， Hedgehog等发育相关通路的磷酸化核心组件。

代谢调节相关激酶与底物：覆盖AMPK、mTOR等能量感受激酶及其调控的代谢相关蛋白的磷酸化。

细胞自噬与应激反应蛋白：包括JianCeK1复合物、Beclin-1等自噬启动关键蛋白的磷酸化修饰检测。

检测方法

基于抗体的芯片技术：将针对特定磷酸化位点的特异性抗体点制在固相载体上，用于捕获样本中的目标磷酸化蛋白。

反向蛋白质芯片技术：将待测样本（如细胞裂解液）点制于芯片上，再用标记的磷酸化特异性抗体进行探测。

核酸可编程蛋白质芯片技术：利用DNA寡核苷酸引导带有互补序列的蛋白质在芯片上自组装，实现高密度固定。

微珠为基础的多元检测技术：将不同抗体偶联到具有独特光谱特征的微珠上，在液相中实现多重免疫分析。

化学发光检测法：采用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的二抗，通过添加底物产生化学发光信号进行定量。

荧光标记检测法：使用Cy3、Cy5等荧光染料标记二抗或样本，通过扫描芯片荧光强度进行定量分析。

夹心法免疫检测原理：通过芯片上固定的一抗捕获目标蛋白，再用针对不同表位的标记二抗进行检测，提高特异性。

信号放大技术：采用酪胺信号放大或链霉亲和素-生物素系统等方法，增强微弱信号，提高检测灵敏度。

双色荧光竞争结合实验：将对照与实验样本用不同荧光标记，混合后与同一芯片杂交，直接比较相对磷酸化水平。

数据归一化与统计分析：利用内参蛋白或总蛋白信号进行数据归一化，并运用生物信息学软件进行差异分析和聚类分析。

检测仪器设备

自动化点样机器人：用于将抗体、抗原或样本高精度、高通量地点制到玻片或其他芯片基底上。

固相芯片基底：经过特殊化学修饰（如醛基、环氧基）的玻片或膜，用于共价结合蛋白质或抗体。

芯片杂交箱：提供恒温、恒湿及温和振荡的环境，确保芯片上的抗原-抗体反应充分且均一进行。

微孔板洗板机：用于自动化清洗芯片或微孔板，去除未结合的非特异性物质，降低背景信号。

激光共聚焦扫描仪：高分辨率扫描荧光标记的芯片，精确获取每个特征点的荧光强度信号。

CCD成像系统：用于化学发光或荧光芯片的快速全景成像，适用于中低通量的芯片分析。

芯片图像分析软件：识别斑点网格、提取信号强度值、扣除背景并进行初步的质量控制。

实验室信息管理系统：管理从样本登记、实验过程到数据输出的全流程信息，确保数据可追溯性。

高性能计算服务器：存储海量的芯片图像和量化数据，并运行复杂的生物信息学统计分析算法。

标准曲线定量仪器：如酶标仪或化学发光仪，用于预先测定样本总蛋白浓度，以便后续上样量标准化。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件