香囊霉菌实时PCR定量检测

因业务调整，部分个人测试暂不接受委托，望见谅。

检测项目

总霉菌定量检测：通过18S rRNA通用引物测定样品中所有霉菌属总量，定量范围10⁰~10⁸拷贝/μL，RSD≤5%

曲霉属特异性检测：针对β-tubulin基因设计探针，可识别黄曲霉、黑曲霉等7种致病曲霉，检出限15CFU/g

青霉属特异性检测：基于calmodulin基因标记，定量产黄青霉、橘青霉等5种常见污染菌，线性范围10¹~10⁶CFU/mL

镰刀菌定量分析：靶向EF-1α基因，检测禾谷镰刀菌等3种产毒菌株，扩增效率90~110%

DNA提取效率验证：采用内标质控法监测提取回收率，要求≥85%

PCR抑制物检测：添加外源Internal Amplification Control，CT值偏移≤1.5

引物探针特异性验证：通过BLAST比对确保无交叉反应，非目标菌株扩增阴性

标准曲线建立：采用10倍梯度稀释标准品（10²~10⁸拷贝数），R²≥0.99

扩增效率验证：斜率-3.1~-3.6，对应效率90~110%

重复性验证：同批次检测CV≤7%，批间CV≤10%

阳性对照设置：含10³CFU/mL标准菌株ATCC15517

阴性对照设置：无模板对照及无引物对照

检测范围

草本填充型香囊：艾叶、薄荷、薰衣草等植物原料制品，检测含水量＞12%时的霉变风险

合成纤维香囊：涤纶/氨纶材质挂饰，检测表面微生物定植量

精油浸渍型香囊：玫瑰精油、檀香精油载体，检测有机溶剂对PCR的影响

车载悬挂香囊：检测高温环境下（60℃）的霉菌孢子存活率

衣柜防霉香囊：检测萜烯类物质存在时的微生物抑制效果

中药材配伍香囊：检测陈皮、苍术等易霉变药材的污染阈值

纳米缓释香囊：检测二氧化钛载体表面微生物吸附量

儿童驱蚊香囊：检测柠檬桉油等成分对PCR扩增的干扰

硅胶干燥型香囊：检测吸湿后（RH＞65%）的霉变临界点

香薰石膏香囊：检测多孔材料内部的微生物渗透深度

真丝刺绣香囊：检测蛋白质纤维的生物降解污染

可降解环保香囊：检测PLA/PBAT材料表面菌膜形成量

检测标准

ISO 21527-1:2008 食品和动物饲料微生物学-酵母和霉菌计数

GB/T 39999-2021 纺织品 防霉性能的评价

ISO 18416:2015 化妆品微生物学-白色念珠菌检测

GB/T 38086-2019 生物产品中真菌毒素测定通用要求

USP 2022 通则 1112 非无菌产品的微生物检查

ISO 22117:2019 食物链微生物学-定量检测的实验室要求

GB/T 37223-2018 香料和香精 微生物限量

EP 10.0 2.6.12 非无菌产品微生物检查

ISO 16212:2017 化妆品微生物学-酵母和霉菌计数

GB/T 38483-2020 微生物源抗菌物质抗霉菌活性测定

检测仪器

实时荧光定量PCR仪：采用TaqMan探针法执行40循环扩增，温度均一性±0.3℃，支持FAM/HEX/VIC多通道检测

冷冻研磨仪：在液氮环境（-196℃）下破碎植物纤维组织，粒径处理至100μm，确保DNA释放效率

核酸自动提取仪：磁珠法纯化DNA，内置蛋白酶K消化模块，消除多糖多酚抑制物

超微量分光光度计：检测DNA纯度（A260/A280=1.8±0.2），灵敏度0.2ng/μL

生物安全柜：提供ISO 5级洁净环境，防止气溶胶污染

恒温混匀仪：控制裂解温度（65±1℃），振荡频率2000rpm加速细胞壁破碎

梯度PCR仪：优化退火温度（55~65℃），确定最佳引物结合条件

微孔板离心机：30秒内完成96孔板离心，去除反应体系气泡

电化学工作站：检测PCR反应中氧化还原信号，实时监控扩增异常

恒温恒湿培养箱：模拟香囊存储环境（30℃, RH85%），加速霉菌生长

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件