单细胞组学测序检测

因业务调整，部分个人测试暂不接受委托，望见谅。

检测项目

细胞活性检测：采用台盼蓝拒染法，活细胞率要求≥85%，膜完整性检测误差±2%

单细胞分离效率：微流控分选捕获率≥90%，空滴率控制≤5%，双细胞率≤0.5%

mRNA捕获效率：UMI检测灵敏度0.1 copies/μL，基因检出数≥5,000/cell

文库浓度测定：Qubit荧光定量检测范围0.05-100 ng/μL，CV值≤5%

片段分布分析：Agilent 2100检测片段大小200-1000 bp，主峰偏移±15 bp

测序深度控制：Illumina平台目标覆盖度≥50,000 reads/cell，Q30≥85%

基因表达定量：基于UMI的count矩阵构建，批次效应校正RSD≤10%

细胞聚类分析：t-SNE/UMAP降维，分辨率参数0.4-1.2，轮廓系数≥0.7

差异表达验证：DESeq2算法，|log2FC|≥1，padj≤0.05

细胞周期判定：三阶段评分系统，G1/S/G2M期分类准确率≥95%

拷贝数变异检测：10kb bin分辨率，LOH检出限5%细胞占比

细胞通讯解析：CellPhoneDB互作网络，显著互作p值≤0.01

检测范围

肿瘤组织样本：新鲜/冻存实体瘤单细胞悬液，最低起始量5×10³细胞

血液免疫细胞：PBMC分离样本，CD45+纯度≥95%，红细胞残留≤1%

类器官培养体系：3D培养物消化后单细胞，活性维持≥80%

神经系统样本：脑组织解离神经元，轴突碎片率控制≤15%

胚胎发育材料：小鼠原肠胚期细胞，单细胞捕获直径5-15μm

植物原生质体：纤维素酶解离叶肉细胞，渗透压稳定剂浓度0.4M

微生物群落：土壤/水体样本微生物分选，粒径筛选0.5-5μm

循环肿瘤细胞：CTC富集样本，EpCAM+捕获效率≥70%

药物筛选模型：PDO药敏测试后单细胞，DMSO对照组存活率≥90%

空间转录组配套：激光显微切割样本，组织切片厚度10μm

稀有细胞群体：造血干细胞分选，Lin-CD34+CD38-表型纯度≥98%

冷冻复苏样本：程序降温保存细胞，复苏后活性衰减≤10%

检测标准

ISO 20391-2:2019 细胞计数方法学验证规范

GB/T 37871-2019 高通量测序数据质量要求

EN ISO 15189:2022 医学实验室基因组检测要求

GB/T 34797-2017 单细胞RNA测序技术通则

ISO/IEC 17025:2017 检测实验室通用要求

CLSI MM19-A2 分子检测预分析阶段标准

GB/T 38576-2020 人类血液样本采集与处理规范

FASTQ格式规范：Illumina BaseSpace标准v1.0

MIAME标准：微阵列数据最小信息量要求

MINSEQE指南：高通量测序实验元数据标准

检测仪器

10x Genomics Chromium Controller：微流控芯片系统，实现单细胞凝胶珠包埋，通道通量8样本/次

BD Rhapsody™单细胞分析平台：磁珠捕获技术，支持mRNA/蛋白共检测，最大上样量20,000细胞

Illumina NovaSeq 6000测序仪：双流动槽设计，单次运行输出6Tb数据，读长2×150 bp

Agilent 4200 TapeStation：自动化电泳系统，检测范围200-6000 bp，样本通量96个/小时

Beckman Coulter Vi-CELL BLU：细胞活性分析仪，基于台盼蓝染色，检测速度100样本/天

Thermo Fisher Countess 3 FL：荧光细胞计数仪，AO/PI双染色检测，浓度范围1×10⁴-1×10⁷/mL

Nanodrop Onec紫外分光光度计：核酸纯度检测，检测体积0.5-2μL，A260/A280比值1.8-2.0

Qiagen Qubit 4.0荧光计：高灵敏度核酸定量，检测下限0.05 ng/μL，DSDNA HS检测模式

Sony SH800S细胞分选仪：流式分选系统，分选纯度≥98%，最大速度25,000事件/秒

Miltenyi Biotec GentleMACS解离仪：组织解离系统，预设37个器官程序，温度控制4-37℃

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件