wb蛋白检测

因业务调整，部分个人测试暂不接受委托，望见谅。

检测项目

总蛋白浓度测定：采用BCA法或Bradford法，检测范围0.1-2000μg/mL，变异系数≤5%

SDS-PAGE电泳分离：根据目标蛋白分子量选择8%-15%凝胶浓度，分离精度±2kDa

转膜效率验证：Ponceau S染色检测，要求转膜效率≥95%

一抗结合反应：优化抗体稀释比例（1:500-1:5000），孵育温度4-25℃，时间1-24小时

二抗偶联检测：HRP标记二抗工作浓度1:2000-1:10000，灵敏度≥1pg蛋白

化学发光强度分析：检测动态范围10³-10⁶RLU，信噪比≥20:1

条带灰度值定量：ImageLab软件分析，背景扣除算法误差≤3%

内参蛋白校准：β-actin/GAPDH表达量波动控制在±10%以内

磷酸化蛋白检测：磷酸酶抑制剂添加浓度1-10mM，磷酸化位点特异性验证

膜再生实验：Strip缓冲液pH2.0-2.5处理，抗体去除率≥90%

检测范围

细胞裂解物检测：涵盖贴壁/悬浮细胞系，裂解缓冲液含1% NP-40+0.5%脱氧胆酸钠

组织样本分析：适用于心肝脾肺肾等哺乳动物组织，需30μm切片厚度

血清蛋白检测：非还原条件检测IgG/IgM，灵敏度0.1ng/μL

重组蛋白验证：分子量20-250kDa表达产物纯度≥95%

外泌体标志物：CD63/TSG101检测，超离样本上样量10-30μg

植物蛋白研究：Rubisco大亚基(55kDa)检测需特殊提取缓冲液

细菌表达系统：包涵体蛋白需8M尿素变性处理

磷酸化信号通路：MAPK/STAT通路蛋白磷酸化状态分析

凋亡相关蛋白：Caspase-3切割体(17/19kDa)检测

膜蛋白检测：需添加0.1%SDS增溶剂，跨膜区抗体验证

检测标准

ISO 13485:2016 医疗器械质量管理体系

GB/T 27417-2017 合格评定 化学分析方法验证通则

ISO 9001:2015 质量管理体系要求

GB/T 37864-2019 生物样本中蛋白质检测方法通则

ASTM E3106-17 免疫印迹法标准指南

ISO 17025:2017 检测实验室能力通用要求

GB/T 22278-2008 良好实验室规范原则

IEC 62304:2006 医疗器械软件生命周期过程

GB/T 29791.3-2013 体外诊断医疗器械说明

ISO 14971:2019 医疗器械风险管理

检测仪器

垂直电泳系统：Mini-PROTEAN Tetra系统，可实现4-12泳道同步电泳，恒压/恒流模式切换

半干式转印仪：Trans-Blot Turbo系统，转印效率>90%，7分钟完成标准转膜

化学发光成像仪：ChemiDoc MP系统，CCD分辨率400万像素，动态范围4.8OD

微量分光光度计：NanoDrop OneC，蛋白浓度检测仅需1μL样本，精度±0.2μg/μL

恒温摇床孵化器：Orbital Shaker OS20，温度控制范围4-50℃，震荡精度±5rpm

全自动洗膜机：Auto Western Blot Processor，程序化控制洗膜次数与时间

精密电子天平：XP6微量天平，称量范围0.001mg-6.1g，重复性±0.015mg

pH计：SevenExcellence系列，电极分辨率0.001pH，温度补偿精度±0.1℃

超纯水系统：Milli-Q IQ7000，产水电阻率18.2MΩ·cm，TOC<1ppb

低温离心机：CR22N高速冷冻离心机，最大转速22,000rpm，温控范围-20°C至40°C

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件