基因修复抑制效果测定

检测项目

同源重组修复抑制率：评估抑制剂对HR通路关键蛋白功能的影响，反映细胞修复DNA双链断裂的能力变化。

非同源末端连接抑制率：测定抑制剂对NHEJ通路活性的干扰程度，常用于评估对易错修复路径的抑制效果。

碱基切除修复抑制活性：量化抑制剂对BER通路中糖基化酶或聚合酶功能的抑制，用于评估对单碱基损伤修复的干扰。

核苷酸切除修复抑制效率：测定抑制剂对NER通路识别或切除DNA螺旋扭曲损伤能力的抑制效果。

错配修复功能缺陷度：评估抑制剂导致MMR系统失效的程度，通过监测微卫星不稳定性或突变率增加来判定。

跨损伤合成抑制水平：量化抑制剂对TLS聚合酶活性的影响，反映细胞应对复制叉阻滞损伤能力的下降。

DNA损伤应答信号抑制：检测关键磷酸化信号如γ-H2AX、ATM/ATR底物磷酸化的减弱，评估上游信号通路的抑制。

修复复合物形成阻滞：测定抑制剂对修复焦点形成的干扰，如Rad51焦点或XRCC1焦点的数量减少。

克隆形成存活率变化：通过长期克隆形成实验，综合评估修复抑制导致的细胞增殖与存活能力下降。

细胞周期检查点激活状态：分析修复抑制后细胞周期阻滞情况，如G2/M期阻滞的增强或减弱。

检测范围

小分子化合物库筛选：针对大规模化合物库，高通量初筛其潜在的基因修复抑制活性。

PARP家族特异性抑制剂：专注于PARP1/2/3等抑制剂对PARylation及后续修复过程的抑制效果评估。

ATM/ATR/DNA-PK激酶抑制剂：评估靶向DDR核心激酶的药物对下游修复通路的全局性影响。

Pol θ 聚合酶抑制剂：针对theta介导的末端连接这一替代性修复路径，测定其特异性抑制效果。

CRISPR-Cas9基因编辑工具：评估基因敲除或敲低特定修复基因后，细胞整体修复能力的缺陷程度。

siRNA/shRNA干扰效果验证：测定特定修复基因被RNA干扰后，其对应通路功能抑制的定量数据。

天然产物提取物活性评价：对植物或微生物提取物进行初步活性筛选，判断其是否具有修复抑制潜力。

联合用药协同效应分析：评估修复抑制剂与化疗/放疗联用时，对修复功能的叠加或协同抑制效果。

肿瘤细胞系与耐药模型：在各类肿瘤细胞系及已产生治疗耐药的细胞模型中测试抑制剂的效力。

原代细胞与类器官模型：将检测范围扩展至更接近体内环境的原代细胞或三维类器官培养系统。

检测方法

报告基因检测法：利用基于GFP或荧光素酶的HR/NHEJ报告系统，定量测定修复通路活性。

免疫荧光染色与焦点计数：通过抗体标记特定修复蛋白形成的核内焦点，进行可视化定量分析。

Western Blot蛋白印迹分析：检测修复相关蛋白的表达水平及磷酸化等翻译后修饰状态的变化。

流式细胞术分析：用于定量分析γ-H2AX阳性细胞比例、细胞周期分布及凋亡情况。