凝胶成像系统免疫印迹分析

检测项目

目标蛋白表达量分析：通过特异性抗体检测样品中特定蛋白质的表达水平，是免疫印迹最核心的应用。

蛋白质分子量测定：通过与预染蛋白Marker对比，确定目标蛋白的表观分子量，验证其是否正确。

蛋白质磷酸化修饰检测：使用磷酸化特异性抗体，检测信号通路中关键蛋白的磷酸化状态，反映其活性。

蛋白质二聚体或多聚体分析：在非还原条件下，检测蛋白质是否形成二硫键连接的二聚体或更高级的多聚体。

蛋白切割产物鉴定：例如检测Caspase切割产物或其它蛋白酶解片段，用于细胞凋亡等研究。

不同样品间蛋白表达差异比较：对多个样品（如对照组与实验组）进行同步检测，比较目标蛋白的相对表达差异。

内参蛋白验证：检测如β-actin、GAPDH等看家蛋白，用于校正上样量，确保实验的准确性。

抗体特异性验证：通过观察单一特异性条带，验证所用一抗或二抗的特异性与效价。

融合蛋白标签检测：使用针对His、HA、Flag等标签的抗体，检测重组融合蛋白的表达与纯化情况。

病原体抗原检测：在临床诊断中，用于检测病毒、细菌等病原体的特异性抗原蛋白。

检测范围

细胞裂解液：来自各种培养细胞系的整体蛋白样品，是分子机制研究最常用的样本类型。

组织分浆液：来自动物或临床手术获取的组织样本，用于在体水平的蛋白表达分析。

血清或血浆样本：用于寻找疾病生物标志物或检测循环系统中的特定抗原/抗体。

细菌或酵母裂解物：用于原核或真核表达系统的重组蛋白检测及微生物学研究。

植物蛋白提取物：应用于植物生理学、遗传改良及抗逆性机制等研究领域。

线粒体、细胞核等亚细胞组分：通过细胞器分离技术获得的组分，用于蛋白的亚细胞定位研究。

免疫共沉淀（Co-IP）产物：用于验证蛋白质之间的相互作用，检测互作蛋白。

纯化蛋白样品：对经过层析、沉淀等方法纯化后的蛋白进行纯度鉴定和浓度估算。

尿液、脑脊液等体液：在临床检验中，用于无创或微创检测特定疾病相关的蛋白标志物。

石蜡包埋组织提取蛋白：从存档的病理标本中提取蛋白，进行回顾性研究与诊断。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）：根据分子量大小分离蛋白质的关键第一步，使蛋白质变性并带上负电荷。

湿式转印法：将凝胶中分离的蛋白质通过电场转移至固相载体（如PVDF膜或NC膜）上的经典方法。

半干式转印法：一种更快速、节省缓冲液的转印方法，利用滤纸和膜直接接触凝胶进行转印。

膜封闭：使用脱脂奶粉或BSA溶液封闭膜上的非特异性结合位点，减少后续抗体的非特异性吸附。

一抗孵育：使用针对目标蛋白的特异性一抗与膜上的靶蛋白结合，是决定实验特异性的核心步骤。

二抗孵育：使用连接有酶（如HRP）或荧光基团的二抗与一抗结合，用于信号放大与检测。

化学发光法（ECL）检测：最常用的方法，HRP催化底物发光，通过凝胶成像系统捕获光信号并成像。

<强荧光二抗检测法: 使用带有荧光基团（如Cy3, Cy5, IRDye）的二抗，直接在特定波长激光激发下成像。

<强显色底物法（DAB/NBT）: 使用酶促反应产生不溶性有色沉淀进行显色，但灵敏度和动态范围通常低于化学发光法。

<强图像分析与定量: 使用凝胶成像系统配套软件对条带的光密度或荧光强度进行定量分析，计算相对表达量。

检测仪器设备

<强垂直电泳槽: 用于进行SDS-PAGE蛋白分离的核心装置，包括玻璃板、夹子、缓冲液槽和电泳电源。

<强转印装置: 分为湿转槽和半干转仪，提供稳定电场将凝胶中的蛋白转移至固相膜上。

<强化学发光凝胶成像系统: 核心设备，配备高灵敏度CCD相机、暗箱和光学镜头，用于捕获ECL发出的微弱冷光。

<强荧光凝胶成像系统: 配备特定波长激发光源和相应发射滤光片，用于检测荧光标记的蛋白条带。

<强多功能成像系统: 集成了化学发光、荧光、白光透射/反射等多种成像模式的一体化高端设备。

<强冷却CCD相机: 成像系统的“眼睛”，通过深度制冷降低噪声，显著提高信噪比和检测灵敏度。

<强图像分析软件: 系统配套的正规软件，用于图像采集、条带识别、分子量标定、背景扣除和密度定量。

<强摇床: 用于孵育抗体和洗涤膜时提供温和的振荡，确保反应均匀且充分。

<强微波炉或水浴锅: 用于加热蛋白样品使其变性，或在抗原修复步骤中使用。

<强精密移液器与分液设备: 确保样品、试剂精确加样与分配，是保证实验重复性的基础工具。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件