等电点聚焦结合试验

检测项目

蛋白质纯度分析：评估目标蛋白质样品中是否含有杂质或其他蛋白质成分，是质量控制的关键步骤。

蛋白质等电点测定：精确测定蛋白质在电场中净电荷为零时的pH值，是其重要的物理化学参数。

蛋白质翻译后修饰鉴定：检测如磷酸化、糖基化等修饰引起的等电点偏移，用于研究蛋白质功能调控。

蛋白质复合物分析：研究蛋白质-蛋白质相互作用，分析复合物形成前后等电点的变化。

抗体电荷异质性分析：在生物制药中，评估治疗性抗体因修饰或降解产生的电荷变体。

遗传变异体筛查：检测因单核苷酸多态性（SNP）导致的氨基酸替换所引起的等电点差异。

酶与抑制剂结合研究：分析酶在结合小分子抑制剂后其等电点是否发生改变，用于药物筛选。

抗原表位定位：结合免疫印迹，确定抗体所识别的抗原区域是否影响其电荷分布。

蛋白质稳定性评估：通过考察不同条件下蛋白质等电点的变化，评估其结构稳定性。

生物标志物发现：在差异凝胶电泳等应用中，寻找疾病组与对照组间等电点存在差异的蛋白质。

检测范围

治疗性单克隆抗体：用于抗体药物的电荷变体分析、聚集体检测和批次间一致性评价。

血浆/血清蛋白质组：分析血液中复杂的蛋白质组成，寻找与疾病相关的电荷异构体。

细胞裂解液全蛋白：用于细胞信号通路研究，分析磷酸化等修饰引起的全局性蛋白变化。

重组蛋白制品：对基因工程表达的重组蛋白进行纯度鉴定和产品质量控制。

植物与农作物蛋白质：应用于农业科学研究，分析品种差异或胁迫响应下的蛋白质变化。

微生物表达蛋白：对细菌、酵母等系统表达的蛋白进行特性鉴定和优化工艺评估。

酶制剂：评估工业用或研究用酶制剂的均一性、修饰状态和活性相关性。

疫苗抗原：确保疫苗中关键抗原成分的电荷均一性，关系到疫苗的效力和安全性。

法医科学样本：对血液、唾液等生物检材中的蛋白质进行精细区分，用于个体识别。

食品蛋白质分析：检测食品中蛋白质的掺假、变质或过敏原成分的鉴定。

检测方法

平板凝胶等电点聚焦：在含有载体两性电解质的聚丙烯酰胺平板凝胶上进行，是经典的标准方法。

毛细管等电点聚焦：在毛细管中进行，自动化程度高，分辨率优异，适合定量分析。

固相pH梯度聚焦：使用固定化的pH梯度凝胶条，具有更高的分辨率和重复性。

免疫印迹结合法：IEF分离后，将蛋白质转印至膜上，用特异性抗体进行检测。

原位酶活性染色：聚焦后直接在凝胶上进行酶促反应染色，用于鉴定具有特定活性的蛋白质。

放射自显影检测：对放射性标记的样品（如磷-32标记）进行分离后，通过曝光显影检测。

荧光染色扫描：使用SYPRO Ruby等荧光染料对凝胶中的蛋白质进行染色，灵敏度高。

质谱联用鉴定：将IEF分离后的蛋白点或条带切下，进行胶内酶解和质谱分析以鉴定蛋白质。

双向电泳技术：第一向采用IEF，第二向采用SDS-PAGE，实现蛋白质的高通量分离。

实时成像监测：在cIEF中通过全柱成像检测，实时监控聚焦过程，并直接分析结果。

检测仪器设备

等电点聚焦电泳系统：提供稳定高压电源和冷却平台的专用电泳槽，用于平板凝胶IEF。

毛细管电泳仪：配备紫外或激光诱导荧光检测器的自动化仪器，用于cIEF分析。

全柱成像检测系统：集成于cIEF仪器的光学检测系统，可对整根毛细管进行实时扫描。

多功能电泳电源：可输出高电压（通常高达10000V）、稳定电流的专用电源。

精密pH计：用于校准载体两性电解质pH梯度或测量蛋白质洗脱液的pH值。

水平电泳槽：专门为平板凝胶IEF设计的电泳槽，确保凝胶表面水平及均匀冷却。

凝胶成像系统：包括暗箱、CCD相机和软件，用于采集和分析染色后的凝胶图像。

蛋白转印系统：用于将IEF凝胶上的蛋白质转移至硝酸纤维素膜或PVDF膜上进行免疫检测。

冷冻离心机：用于样品制备，如去除颗粒物、浓缩蛋白样品，保持样品活性。

实验室纯水系统：制备高纯度去离子水，用于配制所有试剂和溶液，避免离子干扰。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件