DNA损伤修复检测

检测项目

彗星实验（单细胞凝胶电泳）：通过电泳后细胞核DNA的迁移情况（形成“彗星”状），直观检测单个细胞的DNA单链或双链断裂损伤。

γ-H2AX焦点分析：检测组蛋白H2AX在丝氨酸139位点磷酸化（γ-H2AX）形成的核内焦点，作为DNA双链断裂的灵敏分子标志物。

宿主细胞复活实验：通过测量受损报告基因（如荧光素酶基因）在宿主细胞内修复后的表达活性，定量评估细胞的整体修复能力。

核苷酸切除修复能力检测：评估细胞修复由紫外线或化学物质引起的大体积DNA加合物（如环丁烷嘧啶二聚体）的能力。

碱基切除修复能力检测：测定细胞清除由氧化、烷基化等引起的受损或错误碱基，并进行正确替换的修复效率。

同源重组修复效率检测：利用特异性报告系统（如DR-GFP），定量分析细胞通过同源重组途径精确修复DNA双链断裂的能力。

非同源末端连接修复效率检测：利用报告系统（如EJ5-GFP），定量评估细胞通过易出错的非同源末端连接途径连接DNA双链断裂末端的效率。

8-羟基脱氧鸟苷检测：定量检测DNA中8-OHdG的含量，作为氧化性DNA损伤的特异性生物标志物。

O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶活性检测：测定MGMT酶的活性，该酶能直接修复由烷化剂引起的O6-甲基鸟嘌呤损伤。

DNA损伤反应信号通路蛋白磷酸化检测：通过免疫印迹等技术，检测ATM、ATR、Chk1、Chk2等关键激酶的磷酸化水平，反映DNA损伤应答信号通路的激活状态。

检测范围

肿瘤学研究：评估肿瘤细胞的DNA修复缺陷，用于研究肿瘤发生机制、预后判断及开发合成致死疗法。

癌症风险评估与早筛：检测个体（尤其是有家族史者）的DNA修复能力，作为癌症易感性的生物标志物。

放疗与化疗疗效预测：通过检测肿瘤组织的修复蛋白表达或功能，预测其对放疗或DNA损伤类化疗药物的敏感性。

药物研发与毒性评价：评估新药（尤其是化疗药、靶向药）是否会引起DNA损伤，或作为DNA修复抑制剂来增强现有疗法效果。

环境与职业暴露评估：监测接触辐射、化学毒物（如苯、重金属）人群的DNA损伤与修复水平，进行生物剂量学评价。

衰老机制研究：研究DNA损伤累积与修复能力随年龄下降在细胞及机体衰老过程中的作用。

遗传性DNA修复缺陷疾病诊断：用于着色性干皮病、共济失调毛细血管扩张症、范可尼贫血等疾病的辅助诊断与分型。

生殖与发育毒理学：评估环境因素或药物对生殖细胞（精子、卵子）DNA完整性及胚胎发育的影响。

营养与抗氧化研究：研究维生素、抗氧化剂等营养素对减轻DNA氧化损伤、增强修复能力的保护作用。

基础细胞生物学研究：深入探索DNA损伤应答、细胞周期检查点激活、修复通路选择等基本生命过程。

检测方法

免疫荧光显微镜技术：用于定位和定量细胞内DNA损伤修复相关蛋白（如γ-H2AX、Rad51）形成的焦点，具有单细胞分辨率。

流式细胞术：可快速、高通量地分析大量细胞中γ-H2AX水平、细胞周期分布与DNA损伤的关联，或进行彗星实验的流式版本检测。

蛋白质免疫印迹：半定量检测DNA损伤修复通路中关键蛋白的表达水平及其翻译后修饰（如磷酸化）。

酶联免疫吸附测定：利用特异性抗体，定量检测体液（如尿液、血清）或细胞裂解液中的特定DNA损伤产物（如8-OHdG）。

高通量测序技术：通过全基因组或靶向测序，绘制DNA损伤图谱，分析突变特征，并研究修复过程对基因组的影响。

报告基因检测系统：将特定的修复底物（如含有I-SceI酶切位点的GFP报告基因）整合到基因组，通过流式或荧光显微镜读取修复结果。

高效液相色谱-串联质谱：作为金标准方法，精确、灵敏地定量分析DNA中多种化学修饰的损伤碱基。

微核试验与胞质分裂阻滞法：通过计数微核的形成，评估DNA损伤导致的染色体断裂或丢失，是经典的遗传毒性检测方法。

切口翻译法：利用外源酶在DNA损伤位点引入标记的核苷酸，从而可视化或定量DNA的损伤位点。

实时荧光定量PCR：通过比较长片段与短片段DNA的扩增效率，间接评估DNA链上损伤（阻碍聚合酶延伸）的累积程度。

检测仪器设备

荧光显微镜：配备高分辨率相机和图像分析软件，用于观察和分析免疫荧光标记的DNA损伤修复焦点及彗星图像。

流式细胞仪：用于高速、多参数分析细胞群的DNA含量、γ-H2AX荧光强度等，实现高通量检测。

化学发光/荧光成像系统：用于检测蛋白质免疫印迹、ELISA板等信号，对修复相关蛋白进行定量分析。

彗星分析系统：专门用于彗星实验，包括电泳槽、专用图像采集设备和自动分析软件，可定量尾矩、尾长等参数。

高效液相色谱仪：与质谱或电化学检测器联用，用于分离和定量复杂的生物样品中的DNA损伤产物。

质谱仪：尤其是串联质谱，作为HPLC的检测器，提供高灵敏度和特异性的DNA加合物定性定量分析。

实时荧光定量PCR仪：用于执行定量PCR实验，评估DNA损伤程度或修复相关基因的表达变化。

凝胶成像系统：用于对常规电泳凝胶（如检测DNA片段化的琼脂糖凝胶）进行图像采集和分析。

细胞培养与处理设备：包括CO2培养箱、生物安全柜、辐射源（如X射线机、紫外灯）或化学损伤剂处理平台，用于诱导可控的DNA损伤。

高通量测序仪：用于进行全基因组、外显子组或靶向测序，从基因组层面深入解析DNA损伤与修复的全局模式。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件