电泳分子量验证

检测项目

重组蛋白分子量确认：验证基因工程表达的重组蛋白表观分子量是否与理论值一致，判断表达是否正确。

抗体轻重链分析：通过还原电泳验证抗体的轻链和重链分子量，评估抗体的完整性和纯度。

酶切产物鉴定：对限制性内切酶或蛋白酶消化后的DNA/蛋白片段进行分子量测定，验证酶切效率与产物大小。

多肽合成验证：确认化学合成多肽的分子量，作为合成成功与否的关键质控指标。

蛋白质复合物亚基分析：在变性条件下分析复合物中各亚基的分子量，解析复合物组成。

蛋白降解产物检测：检测样品中是否出现低于目标分子量的条带，以评估蛋白质的稳定性或降解情况。

核酸片段大小确定：对PCR产物、质粒酶切片段、RNA等进行电泳，通过与标记物对比确定其精确大小。

翻译后修饰初步判断：通过分子量的异常偏移（如糖基化、磷酸化导致增重）间接提示可能存在翻译后修饰。

纯度评估：通过主条带分子量是否正确及有无杂带，对样品纯度进行辅助评价。

批次间一致性对比：比较不同批次生产样品的电泳分子量图谱，确保产品质量的稳定性和可重复性。

检测范围

蛋白质样品：适用于包括重组蛋白、抗体、酶、细胞裂解液总蛋白在内的各种蛋白质样品。

核酸样品：适用于双链DNA、单链DNA、RNA、寡核苷酸等核酸分子的片段大小分析。

分子量范围（蛋白）：通常可有效分离和验证分子量在5 kDa至250 kDa之间的多肽和蛋白质。

分子量范围（核酸）：可分析从数个碱基对的寡核苷酸到数十kb的DNA大片段。

变性与非变性条件：既可在SDS存在下的变性条件测定亚基分子量，也可在非变性条件下检测完整天然蛋白的迁移率。

还原与非还原条件：通过添加或不添加β-巯基乙醇等还原剂，验证二硫键的存在及其对分子量的影响。

粗提样品：可用于细胞或组织粗提液等复杂混合物中目标分子量的初步验证。

纯化后样品：是纯化后精制品的关键质控步骤，确认目标分子并检查纯度。

溶液与冻干样品：适用于液体状态或经复溶后的冻干粉样品。

多种缓冲体系：样品可溶于多种上样缓冲液，如Laemmli缓冲液、TBE缓冲液、TAE缓冲液等。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：最经典的方法，蛋白质与SDS结合后按分子量大小分离，是分子量验证的金标准。

琼脂糖凝胶电泳：主要用于核酸片段的分离开分子量估算，操作简便快捷。

梯度凝胶电泳：使用浓度梯度凝胶，可扩大线性分离范围，提高分子量测定的准确性。

Western Blotting验证：电泳后转膜，用特异性抗体检测，在验证分子量的同时确认蛋白质身份。

考马斯亮蓝染色法：通用蛋白染色方法，灵敏度适中，用于显色并计算分子量。

银染法：高灵敏度蛋白染色方法，可检测低至纳克级的蛋白，用于微量样品分子量验证。

核酸荧光染色法：使用EB、GelRed、SYBR等染料对核酸染色，在紫外或蓝光下观察并分析。

预染蛋白分子量标准品法：使用在电泳过程中可见的预染Marker，实时监控电泳进程并比对。

内参蛋白比对法：在样品中加入已知分子量的内参蛋白，共同电泳以校准和验证。

图像分析软件计算法：使用凝胶成像系统拍摄后，专用软件根据标准曲线自动计算未知条带分子量。

检测仪器设备

垂直电泳槽：用于进行SDS-PAGE的核心装置，提供稳定的电场进行蛋白分离。

水平电泳槽：主要用于琼脂糖凝胶电泳，进行核酸样品的分离。

高精度电源：提供恒定电压、电流或功率，确保电泳过程稳定、重复性好。

凝胶成像系统：配备特定光源和滤光片的暗箱式成像仪，用于拍摄染色后的凝胶图像。

化学发光成像仪：用于检测Western Blotting后的化学发光信号，高灵敏度验证分子量。

紫外透射仪：传统观察核酸电泳结果的设备，通过紫外光激发荧光染料进行观察。

蓝光透射仪：安全性更高的核酸观察设备，使用蓝光激发，减少对核酸样品的损伤。

凝胶灌制模具：用于制备不同厚度和梳子规格的聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶。

微量移液器：用于精确上样，将样品和分子量标准品加入凝胶加样孔中。

图像分析软件：如ImageJ、Quantity One等，用于分析电泳图像，绘制标准曲线并计算分子量。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件