分离蛋白多糖质谱分析

检测项目

蛋白核心鉴定：通过质谱测序确定构成蛋白多糖的蛋白质核心的氨基酸序列和身份。

糖胺聚糖类型鉴定：分析确定连接在核心蛋白上的糖胺聚糖种类，如硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸肝素等。

糖链长度与聚合度分析：测定糖胺聚糖链的重复二糖单元数量，即链的长度分布。

硫酸化位点与程度分析：精确定位糖链上硫酸基团的修饰位点（O-或N-硫酸化）并评估其修饰程度。

差向异构化分析：鉴定糖醛酸（如葡萄糖醛酸与艾杜糖醛酸）的差向异构化状态，对硫酸肝素/硫酸乙酰肝素尤为重要。

糖链连接位点分析：确定糖胺聚糖链与核心蛋白丝氨酸残基（通常位于Ser-Gly序列）的连接位点。

完整蛋白多糖分子量测定：使用高分辨率质谱测定完整或接近完整的蛋白多糖分子的分子量。

糖链寡糖图谱分析：通过酶解或化学降解产生寡糖片段，进行质谱图谱分析以获取结构信息。

翻译后修饰分析：检测核心蛋白上除糖基化外的其他修饰，如磷酸化、泛素化等。

定量比较分析：对不同样本（如疾病与正常）中的蛋白多糖或其糖链结构进行相对或绝对定量。

检测范围

细胞外基质蛋白多糖：如聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、多功能蛋白聚糖（Versican）、核心蛋白聚糖（Decorin）等。

细胞表面蛋白多糖：如 syndecans、glypicans 等跨膜或GPI锚定蛋白多糖。

分泌型蛋白多糖：如 perlecan、testican 等存在于基底膜或体液中的蛋白多糖。

硫酸软骨素/硫酸皮肤素蛋白多糖：富含硫酸软骨素或硫酸皮肤素链的蛋白多糖家族。

硫酸肝素蛋白多糖：携带硫酸肝素链的蛋白多糖，在信号转导中起关键作用。

硫酸角质素蛋白多糖：如角膜中的 lumican、keratocan，关节软骨中的 fibromodulin。

组织与体液样本：包括软骨、皮肤、血管、肿瘤组织以及血清、尿液、关节滑液等生物体液。

细胞培养上清与裂解液：用于研究细胞分泌或表达的蛋白多糖。

重组表达蛋白多糖：通过基因工程手段表达的、用于结构功能研究的重组蛋白多糖。

酶解产物：经特异性酶（如软骨素酶、肝素酶、胰蛋白酶）消化后产生的核心蛋白肽段或糖链寡糖。

检测方法

液相色谱-质谱联用：核心方法，通过液相色谱分离后进入质谱检测，用于肽段和寡糖分析。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱：常用于完整蛋白多糖分子量测定和寡糖谱的快速分析。

电喷雾电离质谱：提供软电离，适合分析极性大、热不稳定的糖缀合物及其碎片。

串联质谱：通过碰撞诱导解离等技术产生碎片离子，用于糖链序列和修饰位点的解析。

亲水相互作用液相色谱：高效分离亲水性极强的糖链或糖肽，常与质谱联用。

反相液相色谱：用于分离酶解后产生的肽段或去糖基化后的肽段混合物。

强阴离子交换色谱：基于硫酸化程度和电荷差异分离糖胺聚糖链或寡糖。

酶解谱分析：使用高度特异性的糖苷内切酶或外切酶解，结合质谱分析产物以推断结构。

同位素标记定量：如iTRAQ、TMT或代谢标记，用于不同样本间蛋白多糖表达的定量比较。

自上而下质谱：对完整的蛋白多糖分子进行碎裂，直接获取包括修饰在内的全面结构信息。

检测仪器设备

高分辨率质谱仪：如Q-TOF、Orbitrap系列，提供高质量精度和分辨率，是结构解析的核心设备。

三重四极杆质谱仪：适用于靶向定量分析和多反应监测实验。

MALDI-TOF/TOF质谱仪：用于快速分子量筛查和串联质谱分析，尤其适合寡糖图谱。

纳升/高效液相色谱仪：用于在线分离复杂样品，降低样品需求并提高灵敏度。

超声波细胞破碎仪：用于从组织或细胞中有效提取蛋白多糖。

高速冷冻离心机：用于样品制备过程中的沉淀、分离和浓缩。

真空离心浓缩仪：用于干燥和浓缩微量样品，便于后续上样分析。

酶解反应器/恒温孵育器：为蛋白质酶解和糖链酶解提供精确控温环境。

脱盐柱/除盐装置：用于去除样品中的盐分和小分子杂质，防止质谱离子抑制。

凝胶电泳与印迹系统：用于初步分离、鉴定和富集蛋白多糖样品。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件