蛋白质杂质定量测试

检测项目

宿主细胞蛋白残留：定量检测来源于表达系统（如CHO、大肠杆菌）的非目标宿主蛋白，是生物药安全性评价的关键指标。

宿主细胞DNA残留：测定产品中残留的宿主基因组DNA含量，以评估潜在的致癌风险。

Protein A残留：针对采用Protein A亲和层析纯化的抗体药物，检测其工艺中渗漏的Protein A配体。

内毒素含量：定量检测由革兰氏阴性菌产生的热原物质，确保产品符合注射剂要求。

聚集体与片段：分析蛋白质的高分子量聚集体和低分子量降解片段，评估产品稳定性与免疫原性风险。

产品相关杂质：检测目标蛋白自身的变异体，如氧化、脱酰胺、糖基化变异体等。

培养基成分残留：如胰岛素、生长因子、抗生素等添加成分的残留量检测。

下游工艺杂质：检测纯化过程中可能引入的杂质，如层析填料配体、有机溶剂、洗涤剂等。

外源性病毒污染：评估产品中是否存在潜在的病毒颗粒污染，是安全性控制的重要环节。

渗透压摩尔浓度：间接反映溶液中离子和小分子杂质的总体水平，与制剂相容性相关。

检测范围

治疗性单克隆抗体：包括曲妥珠单抗、阿达木单抗等，对其HCP、DNA、Protein A等杂质有严格限量。

重组治疗性蛋白：如胰岛素、生长激素、凝血因子等，需关注宿主相关杂质和产品变异体。

疫苗产品：特别是重组蛋白疫苗，需检测表达系统残留杂质及佐剂相关杂质。

血液制品：如人血白蛋白、免疫球蛋白，需检测生产工艺中可能引入的杂质和污染物。

细胞与基因治疗产品：对生产过程中使用的辅助蛋白（如血清蛋白、细胞因子）残留进行定量。

诊断用酶与试剂：高纯度酶制剂需检测杂酶活性及干扰物质含量。

蛋白类生物类似药：与原研药进行全面的杂质谱比对，是相似性评价的核心。

临床前与临床研究样品：在药物开发各阶段对杂质进行监控，为工艺优化和安全性提供数据。

原料药与制剂：分别对纯化后的原料药和最终配方制剂进行杂质定量，监控工艺和储存稳定性。

细胞培养上清与工艺中间品：在纯化工艺的不同阶段取样检测，用于工艺能力评估和杂质清除验证。

检测方法

酶联免疫吸附测定法：基于抗原-抗体反应的高灵敏度方法，广泛用于HCP、Protein A等特异性杂质定量。

聚合酶链式反应法：用于痕量宿主细胞DNA残留的定量检测，灵敏度极高。

高效液相色谱法：包括反相色谱、尺寸排阻色谱和离子交换色谱，用于分离和定量聚集体、片段及电荷变异体。

毛细管电泳法：特别是毛细管区带电泳和SDS毛细管电泳，用于高分辨率分析蛋白杂质。

质谱分析法：如LC-MS/MS，可对杂质进行鉴定和绝对定量，尤其适用于未知杂质的结构解析。

动态光散射法：快速评估样品中蛋白质聚集体的存在与粒径分布。

浊度法与可见异物检查：用于检测不溶性微粒和宏观聚集体。

鲎试剂法：检测内毒素的经典方法，包括凝胶法和光度测定法。

电泳法：如SDS-PAGE，结合光密度扫描进行半定量分析，是基础且常用的杂质筛查方法。

生物负载与无菌检查：通过培养法或快速微生物检测法，评估微生物污染水平。

检测仪器设备

酶标仪：用于读取ELISA等基于微孔板的检测信号，实现高通量、自动化的吸光度或荧光测量。

实时荧光定量PCR仪：用于宿主残留DNA的定量分析，具备高特异性和宽动态范围。

高效液相色谱仪：配备紫外、荧光或示差折光检测器，是分离分析蛋白质杂质的主力设备。

紫外-可见分光光度计：用于蛋白质浓度测定及部分杂质的吸光度分析。

质谱仪：尤其是串联质谱或高分辨质谱，与液相色谱联用，用于杂质的精确鉴定与定量。

毛细管电泳仪：提供高效分离能力，常用于电荷异质性和纯度分析。

动态光散射仪：用于实时监测蛋白质溶液中的粒径与聚集状态。

激光粒度分析仪：可检测亚微米至微米级的不溶性微粒。

凝胶成像系统：对电泳凝胶进行拍照和光密度分析，用于杂质的半定量评估。

微生物检测系统：包括无菌检查隔离器、微生物快速检测仪等，用于生物负载监控。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件