肠膜蛋白大肠杆菌测试

检测项目

肠膜蛋白（Intimin）基因（eaeA）检测：通过分子生物学方法特异性检测编码肠膜蛋白的eaeA基因，是鉴定肠致病性大肠杆菌（EPEC）和肠出血性大肠杆菌（EHEC）的关键指标。

O抗原血清型分型：基于菌体表面O抗原的差异进行血清学分型，是区分大肠杆菌不同菌株，追溯传染源的重要依据。

H抗原鞭毛分型：对细菌鞭毛H抗原进行鉴定，与O抗原分型结合，构成完整的血清型鉴定（如O157:H7）。

志贺毒素（Stx）基因检测：检测编码志贺毒素（Stx1和Stx2）的基因，用于确认产志贺毒素大肠杆菌（STEC），尤其是EHEC的致病性。

溶血表型检测：在血琼脂平板上观察溶血环，肠出血性大肠杆菌（如O157:H7）通常不溶血或产生微弱溶血，有助于初步鉴别。

山梨醇发酵试验：O157:H7等血清型大肠杆菌通常不发酵或迟缓发酵山梨醇，此特性可用于其选择性初筛。

细菌分离与纯培养：从样本中分离出单一的大肠杆菌菌落，获得纯培养物，是所有后续生化、分子及毒力测试的基础。

生化反应鉴定：通过IMViC（吲哚、甲基红、VP、柠檬酸盐）等系列生化试验，确认分离菌株属于大肠杆菌属。

抗生素敏感性测试：采用纸片扩散法或微量肉汤稀释法，测定菌株对多种抗生素的敏感性，指导临床治疗和监测耐药性。

毒力基因多重PCR检测：利用多重PCR技术，在一次反应中同时检测eaeA、stx1、stx2等多种毒力基因，实现快速、全面的致病性评估。

检测范围

临床腹泻患者粪便样本：对急性腹泻，特别是血性腹泻患者的粪便进行检测，是诊断EPEC、EHEC感染的主要样本来源。

食物样本（肉类、蔬菜、乳制品）：对可能被污染的牛肉馅、生鲜蔬菜、未经巴氏消毒的牛奶等进行监测，是食品安全控制的关键环节。

水源与环境样本：检测饮用水源、地表水、灌溉用水等，评估其被致病性大肠杆菌污染的风险，保障公共卫生安全。

食品加工环境拭子：对食品加工设备、案板、刀具等表面进行采样，监控生产环节的卫生状况和交叉污染。

动物源性样本（粪便、胴体）：特别是反刍动物（牛、羊）的粪便和屠宰后的胴体，它们是STEC/EHEC的主要天然宿主和污染源。

疫情暴发时的溯源样本：在食源性疾病暴发期间，广泛收集可疑食品、环境及患者分离株，进行分子分型比对以追溯共同来源。

即食食品与预包装食品：根据食品安全标准，对即食食品进行大肠杆菌指标菌及特定致病血清型的例行或风险监测。

临床血液样本（特定情况）：对于由EHEC感染引发溶血性尿毒综合征（HUS）的重症患者，可能需要进行血液细菌培养。

生物制品与药品原料：在制药行业，对某些生物制品或原料进行微生物限度检查，包括大肠杆菌的检测。

科研用菌株鉴定与保藏：在微生物学研究、疫苗开发或诊断试剂研制中，对保藏或使用的菌株进行准确的毒力基因型和血清型鉴定。

检测方法

选择性增菌培养法：使用改良EC肉汤或含特定抗生素的增菌液，富集样本中可能含量较低的目标大肠杆菌，提高检出率。

选择性平板分离法：使用山梨醇-麦康凯琼脂（SMAC）、彩虹® O157显色平板等，利用目标菌的生化特性进行初步分离和鉴别。

聚合酶链式反应（PCR）：针对eaeA、stx等特异性基因设计引物，进行核酸扩增，是快速、灵敏、特异的分子检测金标准。

实时荧光定量PCR（qPCR）：在PCR过程中实时监测荧光信号，不仅能定性检测毒力基因，还能进行相对或绝对定量分析。

免疫磁珠分离技术：使用包被有O157等特异性抗体的磁珠，从复杂样本中捕获并浓缩目标细菌，大幅提高后续培养或PCR的灵敏度。

酶联免疫吸附试验（ELISA）：利用特异性抗体检测样本中的细菌抗原（如O157脂多糖）或志贺毒素，适用于高通量初筛。

乳胶凝集试验：将特异性抗体包被在乳胶颗粒上，与分离菌落或增菌液中的细菌发生凝集反应，用于血清型的快速初步鉴定。

脉冲场凝胶电泳（PFGE）

全基因组测序（WGS）：对细菌基因组进行全部测序，可获得最全面的信息，用于精准分型、毒力基因分析、耐药基因预测及进化研究。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）：通过分析细菌独特的蛋白质指纹图谱，对分离出的纯菌落进行快速、准确的菌种鉴定。

检测仪器设备

生物安全柜：提供无菌操作空间，保护操作人员、样品和环境，是所有涉及活菌操作的必备基础设备。

恒温培养箱：为细菌的增菌培养和分离培养提供恒定且适宜的温度环境（通常为35-37℃）。

PCR仪（热循环仪）：用于执行PCR和qPCR程序，通过精确的温度循环控制实现目标DNA片段的指数级扩增。

实时荧光定量PCR仪：集成热循环与荧光检测模块，可在扩增过程中实时监测荧光信号，用于定量和定性分析。

核酸提取仪：自动化完成样品裂解、核酸结合、洗涤和洗脱步骤，从各类样本中高效、稳定地提取高质量DNA/RNA。

电泳系统（琼脂糖凝胶电泳）

脉冲场凝胶电泳系统

全自动微生物质谱鉴定系统（MALDI-TOF MS）

酶标仪

免疫磁珠分离器（磁力架）

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件