细胞因子释放酶联免疫吸附试验

检测项目

白细胞介素-1β (IL-1β)：一种重要的促炎细胞因子，参与急性期反应和免疫调节。

白细胞介素-2 (IL-2)：T细胞生长因子，对T淋巴细胞的增殖和分化至关重要。

白细胞介素-6 (IL-6)：多功能细胞因子，参与炎症反应、B细胞分化和急性期蛋白合成。

白细胞介素-8 (IL-8/CXCL8)：一种趋化因子，主要功能是趋化和激活中性粒细胞。

白细胞介素-10 (IL-10)：关键的抗炎细胞因子，能够抑制多种促炎因子的合成。

肿瘤坏死因子-α (TNF-α)：主要由巨噬细胞产生，在炎症、细胞凋亡和免疫调节中起核心作用。

干扰素-γ (IFN-γ)：由活化的T细胞和NK细胞产生，是Th1型免疫反应的关键介质。

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF)：刺激粒细胞和巨噬细胞前体细胞的增殖与分化。

单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1/CCL2)：趋化单核细胞、记忆T细胞和树突状细胞至炎症部位。

血管内皮生长因子 (VEGF)：促进血管生成和增加血管通透性，在肿瘤和炎症中发挥作用。

检测范围

生物制药安全性评价：评估治疗性抗体、融合蛋白等生物制剂潜在的细胞因子释放综合征（CRS）风险。

CAR-T细胞疗法监测：在过继性细胞免疫治疗过程中，动态监测患者血清中细胞因子水平，预警和管理CRS。

疫苗免疫原性评估：检测疫苗接种后机体产生的特异性细胞免疫应答水平。

自身免疫性疾病研究：分析类风湿关节炎、系统性红斑狼疮等患者血清或关节液中细胞因子谱的变化。

感染与炎症机制研究：探讨细菌、病毒感染过程中，机体免疫系统释放的细胞因子动态变化。

肿瘤免疫微环境分析：检测肿瘤组织或患者外周血中与免疫抑制或激活相关的细胞因子。

新药药理与毒理研究：在临床前研究中，评估药物对免疫系统的影响及其可能引起的炎症反应。

移植免疫排斥监测：监测器官移植受者体内与排斥反应相关的炎症因子水平。

基础免疫学研究：用于研究不同免疫细胞亚群在刺激下的分泌功能及其信号通路。

临床辅助诊断与预后判断：作为某些感染性疾病或脓毒症等危重疾病的辅助诊断和预后评估指标。

检测方法

样本采集与处理：规范采集血清、血浆或细胞培养上清液，避免反复冻融，离心去除颗粒物。

试剂盒平衡与准备：将所有试剂和待测样本提前30分钟置于室温平衡，按说明书配制所需工作液。

包被抗体孵育：将特异性捕获抗体预先包被在酶标板微孔中，经过封闭步骤以降低非特异性结合。

加样与孵育：将标准品、质控品和待测样本加入对应微孔，使目标细胞因子被固相抗体捕获。

洗涤：使用洗板机或手动洗板，彻底去除未结合的物质，减少背景干扰。

检测抗体孵育：加入生物素标记的特异性检测抗体，与已捕获的细胞因子结合，形成“夹心”复合物。

酶标二抗孵育：加入辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）标记的链霉亲和素，与生物素结合。

显色反应：加入TMB等底物溶液，酶催化底物产生蓝色产物，加入终止液后变为黄色。

吸光度测定：使用酶标仪在特定波长（如450nm）下读取各孔的吸光度值（OD值）。

数据分析与报告：根据标准品浓度和OD值绘制标准曲线，计算样本中细胞因子的实际浓度。

检测仪器设备

酶标仪（微孔板阅读器）：核心设备，用于测量酶联免疫反应后微孔内溶液的吸光度值。

自动洗板机：用于实验过程中的板孔洗涤步骤，确保洗涤的均一性和高效性，减少人为误差。

恒温孵育箱：为抗原抗体反应提供稳定且精确的温度环境（通常为37℃或室温）。

微量移液器及吸头：用于精确加样和试剂分装，是保证实验准确性的关键工具。

漩涡混合器：用于充分混匀试剂或样本，确保溶液的均质性。

低速离心机：用于处理血液样本，分离血清或血浆，以及去除样本中的沉淀。

超纯水系统：提供符合要求的实验用水，用于配制缓冲液、洗涤液等。

-20℃/-80℃低温冰箱：用于长期保存试剂盒、标准品及待测样本，保持其生物活性稳定。

分析软件：与酶标仪配套或独立的软件，用于数据采集、标准曲线拟合和浓度计算。

生物安全柜：在处理可能具有生物危害性的临床样本时，为操作者提供安全防护和环境净化。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件