核酸类物质荧光检测

检测项目

脱氧核糖核酸（DNA）含量：定量测定样本中双链或单链DNA的总浓度，是分子生物学实验的基础。

核糖核酸（RNA）含量：精确测量总RNA或特定RNA（如mRNA）的浓度，评估RNA提取质量。

双链DNA（dsDNA）特异性定量：使用特异性荧光染料，选择性检测双链DNA，排除单链核酸干扰。

单链核酸（ssDNA/RNA）检测：通过特定染料或探针，专一性识别并定量单链核酸分子。

聚合酶链式反应（PCR）产物定量：在PCR过程中或结束后，通过荧光信号实时或终点监测扩增产物的量。

基因表达水平分析：通过定量逆转录PCR（qRT-PCR）中的荧光信号，测量特定基因的mRNA表达丰度。

核酸纯度评估：通过特定波长下的吸光度或荧光比值（如A260/A280），判断核酸样本中蛋白质、盐分等污染程度。

核酸完整性分析：利用荧光染料结合电泳或毛细管电泳，评估DNA或RNA的降解情况。

核酸杂交效率监测：在荧光原位杂交（FISH）或微阵列中，通过标记探针的荧光强度评估杂交效果。

核酸酶活性检测：基于荧光标记的核酸底物被切割后荧光信号的变化，来测定核酸酶的活性。

检测范围

基因组DNA：从动植物组织、微生物、血液等样本中提取的完整基因组DNA。

质粒DNA：细菌培养物中提取的环状质粒DNA，常用于克隆与转染。

病毒核酸：来自病毒颗粒的DNA或RNA基因组，用于病毒载量检测与病原诊断。

细胞总RNA：从各类细胞中提取的包含mRNA、rRNA、tRNA在内的全部RNA。

信使RNA（mRNA）：携带遗传密码用于蛋白质合成的RNA，是基因表达分析的核心。

小分子非编码RNA：包括microRNA、siRNA等，参与基因调控，需高灵敏度检测。

循环游离DNA（cfDNA）：存在于血液等体液中的片段化DNA，用于无创产前检测和肿瘤液体活检。

合成寡核苷酸：化学合成的短链DNA或RNA片段，用于探针、引物或药物研发。

PCR扩增产物：通过PCR技术特异性扩增得到的DNA片段。

环境样本中的核酸：从土壤、水体等环境样本中提取的微生物群落DNA/RNA，用于宏基因组学研究。

检测方法

SYBR Green I 染料法：一种非特异性嵌入双链DNA小沟的染料，结合后荧光显著增强，常用于实时荧光定量PCR。

TaqMan 水解探针法：基于序列特异性的寡核苷酸探针，其5‘端带报告荧光基团，3’端带淬灭基团，PCR延伸时被水解，释放荧光信号。

分子信标法：采用茎环结构的发夹型探针，与靶序列结合后构象改变，使报告基团与淬灭基团分离而产生荧光。

荧光共振能量转移（FRET）探针法：使用两条相邻结合的探针，分别标记供体和受体荧光基团，杂交后发生能量转移产生特异荧光。

PicoGreen 定量法：对双链DNA具有极高亲和力和选择性的荧光染料，灵敏度可达皮克级，用于微量DNA精确定量。

RiboGreen 定量法：专门用于定量RNA的荧光染料，可区分单链和双链核酸，灵敏度高。

溴化乙锭（EB）染色法：经典的嵌入性荧光染料，用于琼脂糖凝胶电泳后核酸条带的显影，但因有毒性已逐渐被替代。

GelRed/GelGreen 染色法：安全性更高的凝胶核酸染料，替代EB，在紫外光激发下发出强烈荧光。

数字PCR（dPCR）的荧光检测：将样本分割成数万个微反应单元后进行PCR，通过终点检测每个单元的荧光有无进行绝对定量。

等温扩增结合荧光检测：如环介导等温扩增（LAMP），在恒定温度下扩增并利用染料或探针产生荧光信号进行检测。

检测仪器设备

实时荧光定量PCR仪：核心设备，能在PCR循环过程中实时监测荧光信号变化，实现靶标核酸的定量分析。

微孔板荧光读数仪：适用于基于微孔板的高通量核酸定量实验，如使用PicoGreen、RiboGreen的批量样本检测。

数字PCR系统：通过微滴生成或芯片分区技术实现绝对定量的精密仪器，包含微滴生成仪和荧光读取仪。

荧光分光光度计：通过测量样品在特定激发光下发射的荧光强度来定量核酸，尤其适用于高浓度样本。

凝胶成像系统：配备特定激发光源和滤光片的暗箱式设备，用于拍摄经荧光染色的核酸电泳凝胶图像并分析。

毛细管电泳仪（带荧光检测器）：利用毛细管进行电泳分离，并通过激光诱导荧光（LIF）检测器对标记荧光的核酸片段进行高灵敏度、高分辨率分析。

生物分析仪：基于微流控芯片技术的自动化平台，可同时分析核酸的浓度、大小分布和完整性，如Agilent Bioanalyzer。

共聚焦荧光显微镜：用于核酸原位杂交（FISH）等技术的观测，能对组织或细胞内的特异性核酸进行定位和半定量分析。

流式细胞仪：可用于检测经过荧光标记的特定核酸序列的细胞，或在高通量筛选应用中分析基于细胞的核酸报告系统。

恒温扩增荧光检测仪：专为LAMP、RPA等等温扩增技术设计的小型化设备，可实时或终点监测扩增产生的荧光信号。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件