核受体相互作用分析

检测项目

配体结合亲和力测定：定量分析候选化合物与特定核受体配体结合域（LBD）的结合强度，通常以解离常数（Kd）表示。

配体竞争性置换实验：评估测试化合物置换已知放射性或荧光标记配体的能力，用于筛选拮抗剂或激动剂。

核受体二聚化分析：检测核受体（如同源二聚体或与RXR形成异源二聚体）的相互作用强度与动力学。

核受体-辅激活子相互作用：测定核受体在配体激活后与辅激活子蛋白（如SRC-1， CBP/p300）的结合。

核受体-辅阻遏子相互作用：评估核受体在无配体或拮抗剂存在时与辅阻遏子蛋白（如NCoR， SMRT）的结合。

DNA结合活性分析：验证核受体对其特异性DNA反应元件（如ERE， GRE， TRE）的结合能力。

转录激活功能测定：通过报告基因实验（如荧光素酶实验）量化核受体介导的基因转录激活水平。

核转位观察：检测配体刺激后，核受体从细胞质向细胞核的转运过程，是其发挥功能的关键步骤。

蛋白质稳定性变化：分析配体结合对核受体蛋白构象及稳定性的影响，例如通过热位移实验（CETSA）。

泛素化修饰检测：研究配体诱导的核受体泛素化修饰水平变化，这与受体的降解与循环密切相关。

检测范围

类固醇激素受体：包括雌激素受体（ERα/β）、雄激素受体（AR）、孕激素受体（PR）、糖皮质激素受体（GR）和盐皮质激素受体（MR）。

甲状腺激素受体：涵盖甲状腺激素受体（TRα/β）及其对甲状腺激素T3和T4的响应。

维甲酸类受体：包括视黄酸受体（RARα/β/γ）、视黄醇X受体（RXRα/β/γ）及其异构体。

维生素D受体：专门研究1,25-二羟基维生素D3与其受体（VDR）的相互作用及下游信号。

肝脏X受体：涉及脂代谢调控的关键受体LXRα和LXRβ。

法尼醇X受体：研究外源物代谢的核心受体FXR及其配体结合特性。

过氧化物酶体增殖物激活受体：涵盖PPARα， PPARβ/δ和PPARγ， 它们在糖脂代谢中起核心作用。

孤儿核受体：针对尚未发现内源性配体的核受体，如Nur77， COUP-TF等，进行配体挖掘与功能研究。

核受体辅助因子：范围扩展至与核受体相互作用的各类辅激活子、辅阻遏子及通用转录因子。

核受体-DNA复合物：研究范围包括核受体二聚体与不同DNA反应元件序列的特异性识别与结合。

检测方法

放射性配体结合实验：使用放射性同位素标记的配体进行结合分析，是经典的金标准方法，灵敏度高。

荧光偏振/各向异性：利用荧光标记配体结合前后偏振光的变化，实时、均相地检测相互作用，适用于高通量筛选。

表面等离子共振技术：实时、无标记地监测分子间相互作用的动力学参数（如ka， kd），提供丰富的结合信息。

等温滴定量热法：通过测量结合过程中释放或吸收的热量，直接测定结合常数、化学计量比和热力学参数。

酵母双杂交系统：在酵母细胞内验证核受体与辅因子或其他蛋白质之间的直接相互作用。

哺乳动物双杂交系统：在更接近生理环境的哺乳动物细胞中验证蛋白质-蛋白质相互作用。

染色质免疫共沉淀：用于在体内条件下鉴定核受体在基因组DNA上的具体结合位点。

凝胶迁移或电泳迁移率实验：体外验证核受体蛋白与特定DNA探针的结合，通过条带迁移滞后现象判断。

荧光共振能量转移技术：包括FRET和BRET，用于在活细胞或溶液中研究分子间近距离相互作用及构象变化。

蛋白质组学与质谱分析：通过免疫共沉淀联合质谱技术，大规模鉴定与特定核受体相互作用的蛋白质网络。

检测仪器设备

多功能酶标仪：用于进行荧光偏振、荧光强度、化学发光等读数的检测，是报告基因和FP实验的核心设备。

表面等离子共振仪：如Biacore系列，专门用于实时、无标记的分子互作动力学分析。

等温滴定量热仪：如MicroCal ITC， 直接测量生物分子结合过程中的热力学变化。

激光共聚焦显微镜：用于高分辨率观察核受体的亚细胞定位和动态转位过程。

凝胶成像系统

凝胶成像系统：用于捕获和分析EMSA、Western Blot等凝胶实验的图像，并进行定量分析。

液相色谱-质谱联用仪：用于鉴定共沉淀蛋白、分析配体代谢产物以及研究翻译后修饰。

实时荧光定量PCR仪

实时荧光定量PCR仪：在ChIP-seq验证或报告基因实验中，精确量化特定基因的mRNA或DNA水平。

超速离心机

超速离心机：用于制备细胞核提取物、分离蛋白质复合物等样品前处理步骤。

蛋白纯化系统

蛋白纯化系统：如AKTA系统，用于高效纯化高活性的重组核受体蛋白，为体外研究提供材料。

高通量筛选机器人平台

高通量筛选机器人平台：整合液体处理、孵育和检测模块，实现大规模化合物库的自动化筛选。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件