溶解态蛋白色谱分析

检测项目

蛋白质纯度分析：评估目标蛋白样品中杂质蛋白或非蛋白组分的含量，是质量控制的关键指标。

分子量测定：通过与标准品对比，精确测定目标蛋白的表观分子量或绝对分子量。

等电点测定：确定蛋白质在电场中净电荷为零时的pH值，用于表征蛋白质的电荷异质性。

聚集体和片段分析：检测样品中高分子量聚集物（如二聚体、多聚体）和低分子量降解片段。

电荷异质性分析：鉴定由脱酰胺、氧化、唾液酸化等翻译后修饰引起的电荷变体。

疏水性分析：评估蛋白质表面疏水性的分布，与蛋白质的折叠状态和相互作用相关。

翻译后修饰鉴定：检测和分析磷酸化、糖基化、乙酰化等修饰的存在与程度。

结合常数测定：研究蛋白质与小分子、配体或其他生物大分子之间的相互作用强度和动力学。

稳定性研究：在加速或强制降解条件下，监测蛋白质的理化性质变化，评估其稳定性。

工艺相关杂质检测：鉴定和定量在生产和纯化过程中引入的杂质，如宿主细胞蛋白、DNA、内毒素等。

检测范围

重组治疗性蛋白：如单克隆抗体、融合蛋白、细胞因子等生物药物的研发与质控。

疫苗抗原：对疫苗中的蛋白组分进行纯度、完整性及免疫原性相关的表征。

血浆蛋白制品：分析白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子等血液制品的纯度与活性。

酶制剂：评估工业用或诊断用酶的纯度、比活性和稳定性。

细胞培养上清液：直接分析培养液中分泌表达的目标蛋白及其相关杂质。

蛋白纯化中间品：在纯化工艺的各个阶段监控目标蛋白的富集程度和杂质去除情况。

生物标志物发现与验证：从复杂生物体液（如血清、尿液）中分离鉴定潜在的疾病标志蛋白。

蛋白-药物相互作用：研究候选药物分子与靶点蛋白的结合特性与机制。

食品与饲料蛋白分析：检测特定功能性蛋白含量或鉴别过敏原蛋白。

法医与物种鉴定：通过特征性蛋白图谱对生物样本进行种属来源鉴定。

检测方法

反相高效液相色谱：基于蛋白质疏水性的差异进行分离，常用于肽图分析和分子量测定。

尺寸排阻色谱：依据蛋白质流体力学体积（分子大小）进行分离，主要用于纯度分析和聚集体检测。

离子交换色谱：利用蛋白质表面净电荷的差异进行分离，是分析电荷异质性的核心方法。

疏水相互作用色谱：在高盐条件下依据蛋白质表面疏水 patches 的差异进行分离，用于分析疏水变体。

亲和色谱：利用生物特异性相互作用（如抗原-抗体、酶-底物）进行高选择性分离和纯化。

多维液相色谱：将两种或以上不同分离机理的色谱模式联用，极大提高对复杂样品的分离能力。