蛋白表面等离子共振分析

检测项目

结合动力学分析：实时测定蛋白与配体相互作用的结合速率常数（ka）和解离速率常数（kd），揭示相互作用的动态过程。

亲和力测定：通过计算动力学常数或平衡结合数据，精确测定蛋白与配体相互作用的平衡解离常数（KD），量化结合强度。

特异性验证：通过竞争或抑制实验，验证目标蛋白与候选分子结合的特异性，排除非特异性相互作用。

浓度测定：利用已知亲和力的配体，通过SPR信号响应值对未知样品中的目标蛋白进行绝对定量。

表位定位：通过竞争结合实验，分析不同抗体或配体在目标蛋白上的结合位点是否重叠，用于抗体表征。

热力学参数分析：在不同温度下进行SPR实验，可推导出相互作用的焓变（ΔH）和熵变（ΔS）等热力学参数。

多价态相互作用分析：研究具有多个结合位点的分子（如抗体、多聚体蛋白）的协同结合或亲合力效应。

小分子化合物筛选：高通量筛选与靶点蛋白结合的小分子先导化合物，评估其结合活性和动力学特性。

抗体亲和力成熟评估：比较不同突变体抗体与抗原的亲和力及动力学参数，指导抗体工程优化。

复合物形成与组装：实时监测多组分蛋白复合物的逐步组装过程，分析各组分结合的时序和依赖性。

检测范围

抗原-抗体相互作用：广泛应用于免疫学领域，用于抗体筛选、表征、配对及免疫检测开发。

酶-底物/抑制剂相互作用：研究酶与底物、辅因子或抑制剂的结合，用于酶学机制研究和药物发现。

受体-配体相互作用：分析细胞表面受体（如GPCR、激酶）与其天然配体或药物分子的结合特性。

蛋白质-核酸相互作用：研究转录因子、DNA结合蛋白与特定DNA/RNA序列的结合动力学与特异性。

蛋白质-小分子相互作用：直接检测低分子量化合物与靶蛋白的结合，是药物筛选和优化的重要环节。

蛋白质-脂质相互作用：研究膜蛋白或信号蛋白与脂质分子（如磷脂）的相互作用。

细胞-蛋白质相互作用：将完整细胞或细胞膜固定在芯片上，分析其与可溶性蛋白或配体的粘附作用。

病毒-宿主蛋白相互作用：研究病毒表面蛋白与宿主细胞受体的结合，揭示病毒感染机制。

信号通路蛋白复合物：解析信号转导通路中上下游蛋白间的瞬时或稳定相互作用网络。

生物治疗药物表征：对单克隆抗体、融合蛋白、ADC等生物药的活性、亲和力及稳定性进行关键质量属性分析。

检测方法

直接结合法：将一种相互作用物（配体）固定于芯片表面，直接检测另一种物质（分析物）在溶液中的结合与解离。

捕获法：通过高亲和力的捕获分子（如抗体、链霉亲和素）将配体定向固定在芯片表面，保持其活性构象。

竞争/抑制法：在溶液中加入竞争分子，通过分析物响应信号的降低来评估竞争分子的结合能力。

多循环动力学分析：在每个循环中使用不同浓度的分析物流过固定配体表面，用于精确计算动力学常数。

单循环动力学分析：在一个结合-解离循环中连续注入递增浓度的分析物，节省样品和时间，适用于稀缺样品。

浓度测定法：利用已知亲和力的配体，通过稳态响应值与浓度成正比的关系，计算未知样品的浓度。

表位分箱法：将不同抗体依次结合到已固定抗原的表面上，根据后一个抗体的结合响应判断其表位是否重叠。

pH依赖性扫描：在不同pH条件下进行结合实验，评估pH对相互作用的影响，用于了解结合依赖的离子键。

温度依赖性扫描：在不同温度下进行实验，通过范特霍夫方程计算相互作用的热力学参数。

再生条件筛选：系统测试不同pH、离子强度或添加剂的溶液，以找到能完全解离结合物而不损伤固定配体的再生条件。

检测仪器设备

SPR光学检测系统：核心光学部件，通常基于棱镜耦合的衰减全反射原理，用于实时监测芯片表面折射率的变化。

微流体系统：包括精密的液体处理单元、注射泵和微流道芯片，确保样品以稳定、层流的方式流经传感表面。

传感芯片：核心耗材，通常为镀有金膜的玻璃片，金膜表面修饰有羧基基团等化学基质，用于共价固定生物分子。

自动进样器：用于自动、精确地切换和注入样品、缓冲液及再生溶液，实现高通量或长时间无人值守运行。

温控系统

温控系统：对芯片仓和样品盘进行精确的温度控制（通常为4-40°C），确保实验条件的一致性和重复性。

数据采集与分析软件：实时采集传感器响应数据（传感图），并提供动力学拟合、亲和力计算等正规分析模块。

芯片预处理设备：如等离子清洗机或UV臭氧清洗机，用于在固定前清洁和活化芯片金膜表面。

氨基偶联试剂盒

氨基偶联试剂盒：包含N-羟基琥珀酰亚胺和碳二亚胺等试剂，用于将带有伯胺的蛋白质共价固定到羧基芯片上。

链霉亲和素传感芯片

链霉亲和素传感芯片：预固定了链霉亲和素的芯片，可高效、定向地捕获生物素化的配体分子。

参比流通池或参比通道

参比流通池或参比通道

参比流通池或参比通道

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件