结合特异性免疫印迹试验

检测项目

目标蛋白鉴定：利用特异性抗体确认样品中是否存在特定的目标蛋白质。

蛋白质分子量测定：通过与已知分子量的标准品对比，估算目标蛋白的表观分子量。

蛋白质表达水平分析：通过信号强度半定量或定量比较不同样品间特定蛋白的表达差异。

蛋白质翻译后修饰检测：使用针对磷酸化、糖基化、乙酰化等修饰的特异性抗体进行检测。

蛋白质亚型分析：区分同一基因产生的不同剪接变体或修饰状态下的蛋白亚型。

抗体特异性验证：验证新制备或商业抗体的特异性，确认其只与目标蛋白结合。

蛋白质相互作用初筛：与免疫共沉淀结合，验证潜在的蛋白质-蛋白质相互作用。

疾病相关生物标志物确认：在临床样本中确认与特定疾病相关的标志性蛋白的存在。

重组蛋白表达验证：在细胞或细菌表达系统中，验证重组蛋白是否成功表达及大小是否正确。

蛋白质降解产物分析：检测蛋白质在样品处理或病理条件下产生的特异性降解片段。

检测范围

细胞裂解液：来自培养的动物、植物或微生物细胞的蛋白质提取物。

组织匀浆液：从动物或植物组织中提取的复杂蛋白质混合物。

血清与血浆样本：用于检测循环系统中的抗体、细胞因子或其他疾病标志物。

脑脊液及其他体液：用于神经系统疾病或其他系统疾病的生物标志物研究。

重组蛋白样品：纯化后的重组蛋白，用于验证其免疫反应性或作为阳性对照。

植物提取物：包含各种植物源性蛋白质，用于农业或植物生物学研究。

细菌与酵母裂解物：用于原核或真核微生物的蛋白质表达及功能研究。

病毒蛋白组分：分析病毒结构蛋白或非结构蛋白的表达与特性。

线粒体等细胞器提取物：用于亚细胞定位的蛋白质组学研究。

免疫沉淀产物：经过免疫沉淀富集后的特定蛋白或其复合物，用于后续验证。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）：依据分子量大小分离蛋白质混合物的第一步关键电泳技术。

蛋白质转膜：将凝胶中分离的蛋白质转移到固相支持膜（如PVDF或硝酸纤维素膜）上。

膜封闭：使用脱脂奶粉或BSA溶液封闭膜上的非特异性结合位点，减少背景信号。

一抗孵育：使用针对目标蛋白的特异性一抗与膜上的蛋白进行特异性结合。

洗涤步骤：使用TBST或PBST缓冲液洗去未结合和非特异性结合的一抗。

二抗孵育：使用偶联了酶（如HRP）或荧光基团的二抗，与一抗的Fc段结合。

化学发光底物显影：加入HRP的化学发光底物，在暗室中通过X光胶片或成像系统捕获信号。

荧光检测法：使用荧光标记的二抗，通过荧光扫描仪直接检测信号，动态范围更宽。

显色底物法：使用能产生不溶性有色沉淀的底物（如DAB），直接在膜上形成可见条带。

Strip与Reprobe：使用特殊缓冲液剥离膜上的抗体，以便用其他抗体对同一张膜进行再次检测。

检测仪器设备

垂直电泳槽：用于进行SDS-PAGE，实现蛋白质按分子量分离的核心装置。

电转仪（湿转或半干转）：提供电场，将凝胶中的蛋白质高效转移至固相膜上的关键设备。

摇床（水平或三维）：用于孵育和洗涤过程中确保膜与溶液充分、均匀接触。

化学发光成像系统：高灵敏度CCD相机系统，用于捕获和定量分析化学发光信号。

荧光扫描成像仪：用于检测和定量荧光标记二抗发出的特定波长荧光信号。

暗室与X光胶片自动洗片机：传统但可靠的化学发光信号记录与显影设备组合。

精密电子天平：用于准确称量试剂、药品和样品，保证实验重复性。

pH计：用于精确配制各种缓冲液，确保电泳和转膜效率。

微波炉或水浴加热器：用于快速加热蛋白样品使其变性，或加速膜封闭、洗涤过程。

超纯水系统：提供无离子、无核酸酶/蛋白酶的超纯水，是配制所有试剂的基础。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件