蛋白糖基化位点检测

检测项目

N-连接糖基化位点鉴定：识别蛋白质上天冬酰胺（Asn）残基在序列“Asn-X-Ser/Thr”（X≠Pro）模体中的糖基化修饰。

O-GalNAc糖基化位点鉴定：鉴定丝氨酸（Ser）或苏氨酸（Thr）残基上的粘液型O-连接糖基化，常见于膜蛋白和分泌蛋白。

O-GlcNAc糖基化位点分析：检测细胞内蛋白质丝氨酸/苏氨酸残基上的单糖N-乙酰葡糖胺修饰，这是一种动态可逆的翻译后修饰。

糖基化位点占据率测定：定量分析特定糖基化位点被糖链占据的百分比，反映修饰的完全程度。

糖链类型与结构分析：在鉴定位点的同时，解析连接在该位点上的聚糖结构，如高甘露糖型、复合型或杂合型。

位点特异性糖型异质性分析：研究同一糖基化位点上连接的不同糖链结构（糖型）的组成和分布。

差异糖基化位点比较：对比不同生理、病理或实验条件下，蛋白质组中糖基化位点及其修饰水平的变化。

糖基化对蛋白构象的影响评估：间接评估糖链的添加对蛋白质局部或整体三维结构的影响。

糖基化酶切效率验证：验证使用PNGase F等糖苷酶去除糖链以暴露修饰位点的处理效率。

糖肽富集方法效能评价：评估亲水相互作用色谱、凝集素亲和富集等方法对目标糖肽的捕获效率和特异性。

检测范围

血清/血浆蛋白质组：检测血液中循环蛋白（如免疫球蛋白、载脂蛋白）的糖基化修饰，用于疾病生物标志物发现。

细胞膜表面蛋白：专注于定位于细胞膜上的受体、通道蛋白等的糖基化，研究其在细胞识别和信号转导中的作用。

细胞分泌组与外泌体：分析细胞分泌到胞外的蛋白质以及外泌体表面蛋白的糖基化特征。

组织样本全蛋白质组：从动物或临床组织样本中系统性鉴定和比较不同组织间的蛋白糖基化图谱。

重组治疗性蛋白药物：对单克隆抗体、融合蛋白等生物药的糖基化进行严格质控，确保其效力和安全性。

植物与微生物来源蛋白：研究植物蛋白或真菌、细菌表达系统产生的重组蛋白的糖基化模式差异。

特定细胞器内蛋白：如内质网、高尔基体等参与糖基化加工的细胞器内蛋白质的修饰状态分析。

疾病模型差异蛋白：比较癌症、自身免疫病、神经退行性疾病等模型与正常状态下蛋白质糖基化的差异。

动态修饰过程监测：追踪在细胞分化、激活或细胞周期进程中，关键蛋白糖基化位点的动态变化。

古菌与特殊物种蛋白：探索进化上古老或特殊物种中存在的非典型糖基化修饰形式与位点。

检测方法

基于质谱的糖蛋白质组学：利用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术，通过分析糖肽的质谱图谱来鉴定糖基化位点和糖链结构。

凝集素亲和富集-质谱联用：使用具有特定糖结合特性的凝集素富集糖肽或糖蛋白，再结合质谱进行深度分析。

亲水相互作用色谱富集法：利用糖肽的亲水性将其与非糖基化肽段分离，是质谱前常用的非标记富集策略。

化学酶法标记与富集：如通过氧化邻位连接技术将糖链标记上生物素，进而进行高效富集和检测。

凝集素芯片技术：将多种凝集素固定在芯片上，高通量地分析样本中整体糖链的结合模式，间接反映糖基化状态。

酶解辅助位点鉴定：使用PNGase F（在H2^18O中）酶切N-糖链，使天冬酰胺转化为天冬氨酸并引入质量标签，从而精确定位位点。

电子转移/高能碰撞解离质谱：应用ETD/EThcD等碎片化技术，在质谱中更好地保留糖链碎片信息，实现位点和糖结构的同步解析。

多反应监测质谱：针对已知的特定糖基化位点，开发MRM或PRM方法进行高灵敏度、高重复性的靶向定量分析。

生物信息学预测与验证

Western Blot结合糖苷酶处理：通过比较糖苷酶处理前后蛋白质在电泳中的迁移率变化，初步判断蛋白质是否发生糖基化及类型。

检测仪器设备

高分辨率液相色谱-串联质谱联用仪：如Q-Exactive系列、Orbitrap Fusion系列，是进行深度糖蛋白质组学分析的核心设备。

纳升液相色谱系统：与质谱联用，用于微量样本（如细胞级别）的梯度分离，提高检测灵敏度。

凝集素芯片扫描仪：专用干读取凝集素芯片上的荧光信号，实现高通量糖组学图谱分析。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱：用于快速分析酶解释放的游离聚糖或简单糖肽的分子量。

超高效液相色谱仪：用于糖肽或游离聚糖的高效、快速分离，常与质谱联用。

毛细管电泳-质谱联用仪：提供与LC互补的分离机制，特别适用于带电糖型或微量样品的分离鉴定。

荧光扫描成像系统：用于检测基于凝集素荧光标记或凝胶电泳后荧光染色的糖蛋白。

生物分子相互作用分析系统

自动化样品处理工作站：实现从酶解、富集到上样前处理的自动化，提高实验通量和重复性。

高性能计算集群与服务器：用于处理海量的质谱原始数据，运行搜库软件和生物信息学分析流程。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件