肽段修饰定量实验

检测项目

磷酸化修饰定量：对丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的磷酸化水平进行精确定量，是信号转导研究的关键。

乙酰化修饰定量：主要针对赖氨酸残基的乙酰化状态进行定量，与基因表达调控和代谢密切相关。

泛素化修饰定量：对蛋白质泛素化修饰进行鉴定与定量，用于研究蛋白质降解、DNA修复等过程。

甲基化修饰定量：对赖氨酸和精氨酸的甲基化程度进行定量分析，在表观遗传学中至关重要。

糖基化修饰定量：对N-连接或O-连接糖基化修饰进行定量，涉及蛋白质定位、免疫识别等功能。

SUMO化修饰定量：对小泛素相关修饰物（SUMO）共价连接进行定量，参与核转运、转录调控。

脂质化修饰定量：如豆蔻酰化、棕榈酰化等修饰的定量，影响蛋白质的膜定位与信号传导。

氧化修饰定量：对甲硫氨酸、半胱氨酸等的氧化状态进行定量，与氧化应激和疾病相关。

硝基化修饰定量：对酪氨酸硝基化进行定量分析，是活性氮物种介导的重要蛋白质修饰。

丙二醛修饰定量：对蛋白质受脂质过氧化产物丙二醛的加合修饰进行定量，反映氧化损伤程度。

检测范围

细胞裂解液：来自培养细胞的总蛋白提取物，是最常见的研究样本类型。

组织样本：来自动物或临床手术的组织标本，可反映生理或病理状态下的修饰谱。

血清/血浆：血液来源的液体活检样本，用于寻找疾病相关的修饰生物标志物。

外泌体/微囊泡：对细胞分泌的囊泡中的蛋白质修饰进行分析，具有重要的细胞通讯研究价值。

亚细胞器组分：如线粒体、细胞核、高尔基体等分离组分，用于定位特异性修饰事件。

免疫共沉淀产物：通过抗体富集的特定蛋白或其互作复合物，可研究其特异的修饰状态。

植物提取蛋白：适用于植物生物学研究，分析植物特有的或保守的翻译后修饰。

微生物蛋白提取物：用于细菌、真菌等微生物的修饰组学研究，揭示其生理调控机制。

石蜡包埋组织：对临床存档的FFPE样本进行修饰分析，实现回顾性临床研究。

低丰度修饰肽段富集后样本：经过特异性富集手段处理后的样本，极大扩展了可检测的动态范围。

检测方法

标记定量（TMT/iTRAQ）：利用同位素或同重元素标记试剂对多组样本进行标记，混合后上机，实现高通量相对定量。

非标记定量（Label-free）：基于质谱峰强度或谱图计数进行相对定量，无需化学标记，流程灵活。

稳定同位素标记氨基酸细胞培养（SILAC）：在细胞培养阶段引入重标氨基酸，实现体内代谢标记，定量准确度高。

靶向质谱（PRM/SRM）：针对已知的特异性修饰肽段进行选择性监测，具有高灵敏度、高重复性和绝对定量潜力。

平行反应监测（PRM）

免疫亲和富集：使用修饰特异性抗体（如抗磷酸化酪氨酸抗体）富集目标修饰肽段，大幅提高检测灵敏度。