寡脱氧核苷酸硫代磷酸酯纯度检测

检测项目

全链长主产物纯度：指目标序列完整、硫代修饰正确的寡核苷酸所占的百分比，是衡量合成质量的核心指标。

n-1及n+1杂质：指比目标产物少一个（n-1）或多一个（n+1）核苷酸的合成失败序列，是主要的工艺相关杂质。

硫代磷酸酯键连接率（%PS）：定量分析寡核苷酸骨架上硫代磷酸酯键替代磷酸二酯键的比例，直接影响其稳定性和生物活性。

碱基修饰杂质：检测在合成或储存过程中可能发生的碱基损伤或非预期修饰，如脱嘌呤、氧化等。

缺失序列杂质：指在合成过程中因偶联失败而产生的内部缺失一个或多个核苷酸的短链杂质。

二聚体及多聚体：检测因合成副反应形成的、由两条或多条链通过共价键连接而成的高分子量杂质。

对映体比例：硫代磷酸酯键为手性中心，需检测其Rp和Sp两种立体构型的比例，这对药效有潜在影响。

有机溶剂残留：检测合成及纯化工艺中使用的乙腈、三乙胺等有机溶剂的残留量，属于工艺杂质。

金属离子残留：测定合成过程中可能引入的钠、钾、镁、锌等金属离子含量，关系到产品的安全性和稳定性。

游离5‘-OH或3’-OH：检测未完全脱保护或降解产生的末端羟基杂质，可能影响后续的标记或偶联反应。

检测范围

反义寡核苷酸原料药：作为直接用于制剂生产的活性药物成分，需进行全面的纯度与杂质谱分析。

化学合成中间体：对合成过程中关键步骤的中间产物进行检测，以监控合成工艺的稳定性。

制剂成品：对最终制成的注射液、冻干粉等剂型中的寡核苷酸进行含量和纯度确认。

对照品/标准品：用于分析方法开发与验证、系统适用性试验及含量测定的高纯度物质。

工艺开发样品：在合成工艺、纯化工艺开发阶段产生的各种样品，用于优化条件。

稳定性研究样品：在加速或长期稳定性试验中定期取样的样品，用于监测纯度随时间的变化。

降解产物研究样品：通过强制降解实验（如酸、碱、热、氧化）产生的样品，用于鉴定潜在降解杂质。

细胞培养上清或裂解液：在药代动力学或细胞实验后，从生物基质中提取的寡核苷酸样品。

血浆/血清样本：临床前或临床研究中，从动物或人体内采集的含药生物样本，检测代谢产物。

固相合成载体上的粗产物：合成完成后、从固相载体上切割下来但未经纯化的粗品，用于评估合成效率。

检测方法

离子对反相高效液相色谱法：最常用的方法，使用烷基铵盐作为离子对试剂，能有效分离长度相近的核酸片段。

阴离子交换高效液相色谱法：基于寡核苷酸所带负电荷数的差异进行分离，对n-1等杂质分离效果好。

毛细管凝胶电泳法：基于分子筛原理，根据链长和分子大小进行高分辨率分离，是药典推荐方法。

质谱法（包括ESI-MS和MALDI-TOF MS）：用于精确测定分子量，确认序列身份，并鉴定未知杂质结构。

紫外分光光度法：利用260nm附近的特征吸收，快速测定样品浓度和进行初步纯度评估。

强阴离子交换色谱-多角度激光光散射联用法：用于绝对分子量的测定和聚集体的分析。

核磁共振波谱法：主要用于硫代磷酸酯键连接率（%PS）的精确测定和立体化学分析。

酶解法结合色谱分析：使用特定核酸酶解后分析产物，用于评估硫代修饰的均匀性或鉴定修饰位点。

电感耦合等离子体质谱法：专用于检测和定量寡核苷酸样品中痕量金属离子的残留。

气相色谱法/顶空气相色谱法：主要用于检测合成及纯化过程中残留的挥发性有机溶剂。

检测仪器设备

高效液相色谱仪（配备DAD/PDA检测器）：进行IP-RP-HPLC和AEX-HPLC分析的核心设备，用于纯度检查和含量测定。

毛细管电泳仪（紫外或激光诱导荧光检测器）：执行高分辨率的毛细管凝胶电泳分析，分离效率极高。

液相色谱-质谱联用仪（LC-ESI-MS/MS）：将色谱分离与质谱鉴定能力结合，用于杂质鉴定和结构确认。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪：用于快速、准确地测定寡核苷酸的分子量，操作简便。

紫外-可见分光光度计（包括微量核酸分析仪）：用于快速测定寡核苷酸溶液的浓度和纯度（A260/A280比值）。

多角度激光光散射检测器：通常与SEC或AEX色谱联用，用于测定绝对分子量和检测聚集体。

核磁共振波谱仪（高场，如600MHz及以上）：用于%PS定量分析和寡核苷酸高级结构研究的精密仪器。

电感耦合等离子体质谱仪：具备极低的检测限，专门用于超痕量金属元素的分析。

气相色谱仪（配备FID或MS检测器）：用于有机溶剂残留量的定性与定量分析。

自动核酸合成仪与纯化系统：虽然属于制备设备，但其合成与纯化模块的性能直接影响起始样品的质量，是质量控制的前端关键。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件