糖基化通路分析

检测项目

N-糖基化谱分析：系统鉴定和定量蛋白质上天冬酰胺（Asn）连接聚糖的整体组成与结构。

O-糖基化谱分析：专注于丝氨酸（Ser）或苏氨酸（Thr）残基连接糖链的鉴定与相对丰度分析。

糖基转移酶活性测定：定量分析催化特定糖苷键形成的酶（如GnT、FUT家族）的催化活性。

糖苷水解酶活性测定：评估负责切割糖链的酶（如神经氨酸酶、岩藻糖苷酶）的活性水平。

凝集素芯片分析：利用凝集素与糖链的特异性结合，高通量筛选样本中整体糖谱特征。

游离寡糖分析：检测细胞或体液中未与蛋白质或脂质结合的游离寡糖分子。

糖基化位点占有率：精确测定特定蛋白质上潜在糖基化位点被实际修饰的比例。

糖链分支度分析：评估复杂型N-糖链中天线（分支）的数量和类型。

唾液酸化程度分析：定量分析糖链末端唾液酸残基的含量、连接类型（α2,3/α2,6）及修饰。

岩藻糖基化水平：测定核心岩藻糖或末端岩藻糖的修饰水平，与炎症和癌症密切相关。

检测范围

血清/血浆蛋白：分析血液中免疫球蛋白、急性期蛋白等的糖基化变化作为疾病标志物。

细胞膜蛋白：研究细胞表面受体、粘附分子等膜蛋白的糖基化在细胞通讯和信号转导中的作用。

分泌蛋白与胞外基质：涵盖细胞因子、激素及胞外基质成分的糖基化修饰分析。

治疗性抗体：深度表征单克隆抗体等生物药的Fc区N-糖基化，确保效力和安全性。

组织样本：从组织切片或匀浆液中提取蛋白，进行空间或整体糖基化分析。

细胞裂解液：对培养细胞的总蛋白进行糖基化通路状态的整体评估。

外泌体与微囊泡：分析这些囊泡表面蛋白的特定糖型，探索其作为液体活检靶标的潜力。

植物与微生物多糖：研究植物细胞壁多糖或细菌荚膜多糖的结构与生物合成。

糖脂与糖胺聚糖：扩展至脂质连接的糖链（糖脂）和长链多糖（如肝素、硫酸软骨素）的分析。

代谢标记样本：对使用非天然糖（如Ac4ManNAz）代谢标记的细胞或生物体进行点击化学衍生化后的分析。

检测方法

液相色谱-质谱联用：LC-MS/MS是核心方法，用于糖肽、释放的寡糖或糖脂的高灵敏度、高分辨率定性与定量。

凝集素印迹法：利用特定凝集素探针在膜上检测目标蛋白的糖型，方法相对简便快捷。

亲水相互作用液相色谱：HILIC是分离亲水性游离寡糖或糖肽的有效色谱方法，常与MS联用。

毛细管电泳：CE基于电荷和大小分离带电荷的衍生化寡糖，分辨率高，常用于唾液酸分析。

酶联凝集素测定法：ELISA的变体，使用凝集素代替抗体，用于定量样本中特定糖结构的丰度。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱：MALDI-TOF MS常用于寡糖和糖肽的快速质谱指纹图谱分析。

荧光辅助凝胶电泳：将释放的寡糖进行荧光标记后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，实现谱图比较。

核磁共振波谱法：NMR是确定糖链精细结构、异头构型和连接方式的“金标准”，但灵敏度较低。

化学/酶法释放与衍生化：使用PNGase F释放N-糖链，或通过化学标记（如2-AB）为寡糖添加荧光标签以便检测。

基因表达谱分析：通过qPCR或RNA-Seq检测糖基转移酶、糖苷水解酶等相关基因的转录水平，间接反映通路活性。

检测仪器设备

高分辨率质谱仪：如Q-TOF、Orbitrap系列，提供精确质量数，用于复杂糖基化结构的鉴定。

三重四极杆质谱仪：QqQ-MS擅长基于多反应监测模式对已知目标糖肽或寡糖进行高灵敏度定量。

超高效液相色谱仪：UPLC系统提供高压和高柱效，实现复杂生物样本中糖型的高效快速分离。

毛细管电泳仪：配备激光诱导荧光或质谱检测器，用于高分辨率糖谱分离与分析。

荧光扫描仪与凝胶成像系统：用于读取荧光标记寡糖凝胶电泳或凝集素芯片的信号。

微阵列点样与扫描仪：用于制备凝集素芯片或糖芯片，并高通量扫描结合信号。

酶标仪：用于读取基于ELISA或酶活性测定实验的吸光度或荧光信号。

实时荧光定量PCR仪：用于检测糖基化通路相关基因的表达水平变化。

核磁共振波谱仪：高场NMR（如600 MHz及以上）用于糖链结构的精细解析。

自动化样品处理工作站：实现从蛋白提取、酶解、糖链释放到纯化衍生化的全流程或部分流程自动化，提高通量和重复性。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件