蛋白质聚集倾向评估

检测项目

热稳定性分析：评估蛋白质在温度升高条件下的构象稳定性，预测其解折叠和聚集起始点。

化学变性耐受性：通过添加变性剂（如盐酸胈、尿素）测定蛋白质结构稳定性，间接反映聚集倾向。

等电点测定：确定蛋白质表面净电荷为零时的pH值，评估其在等电点附近因静电排斥减弱而聚集的风险。

疏水性分析：测量蛋白质表面或内部的疏水区域暴露程度，高疏水性通常与强聚集倾向相关。

二级结构变化监测：追踪蛋白质从α螺旋、β折叠向无规卷曲或淀粉样结构的转变。

寡聚态分布分析：鉴定和定量样品中单体、二聚体、多聚体等不同聚合状态的蛋白质比例。

动力学溶解度测定：在特定条件下（如温度、pH、离子强度）测量蛋白质的最大可溶浓度。

非共价相互作用评估：分析分子间氢键、范德华力、π-π堆积等对聚集的贡献。

翻译后修饰影响评估：考察氧化、脱酰胺、糖基化等修饰对蛋白质聚集行为的改变。

赋形剂兼容性筛选：测试不同缓冲液、盐类、糖类、表面活性剂等对蛋白质聚集的抑制或促进作用。

检测范围

重组治疗性蛋白：如单克隆抗体、融合蛋白、酶替代疗法药物等生物制剂的开发与质控。

多肽类药物：包括胰岛素、GLP-1类似物等易于形成纤维或聚集体的短链生物分子。

基因治疗载体：评估腺相关病毒（AAV）衣壳蛋白或其它病毒载体蛋白的组装稳定性。

疫苗抗原：确保亚单位疫苗或病毒样颗粒（VLP）抗原在储存和运输过程中的结构完整性。

诊断试剂蛋白：保证用于免疫检测的酶、抗体等关键蛋白试剂的长期稳定性和活性。

工业用酶制剂：优化洗涤剂、生物催化等领域所用酶在苛刻条件下的抗聚集性能。

蛋白质晶体学样品：筛选适合结晶的、单分散性高的蛋白质样品，避免聚集干扰晶体生长。

细胞培养上清与裂解液：在早期表达阶段快速评估目标蛋白的可溶性与聚集状态。

纯化过程各阶段样品：监控层析洗脱峰、超滤浓缩、制剂灌装等步骤中聚集体的产生。

长期稳定性研究样品：对加速稳定性试验和实时稳定性试验中的制剂样品进行定期评估。

检测方法

动态光散射：通过测量溶液中颗粒的布朗运动速度，快速获得流体力學半径分布，判断是否存在聚集体。

静态光散射：测定绝对分子量，区分共价与非共价聚集，并计算第二维里系数评估分子间相互作用。

尺寸排阻色谱-多角度光散射：联用技术，在分离的同时在线测定各组分的绝对分子量和尺寸，是金标准方法之一。

分析型超速离心：基于沉降速度或沉降平衡原理，在接近天然状态下高分辨率分析蛋白质的聚集状态和相互作用。

场流分离：一种无固定相的流场分离技术，特别适用于分析超大分子量、膜蛋白或与载体结合的蛋白聚集体。

纳米颗粒跟踪分析：直接可视化并追踪每个颗粒的运动，提供基于颗粒计数的浓度和尺寸分布信息。

浊度/吸光度测定：通过测量溶液在特定波长（如350nm或600nm）的光密度，快速、简便地评估宏观聚集程度。

显微成像技术：包括光学显微镜、电子显微镜和原子力显微镜，用于直接观察聚集体（如纤维、颗粒）的形貌和大小。

荧光染料结合法：使用硫黄素T、尼罗红、ANS等染料特异性标记聚集态或疏水表面，通过荧光信号变化进行灵敏检测。

红外/拉曼光谱：通过监测酰胺I带等特征光谱峰位的变化，无损分析蛋白质二级结构的转变，常用于固态样品分析。

检测仪器设备

动态光散射仪：核心设备，配备高灵敏度光电倍增管和相关器，用于测量纳米至微米级颗粒的尺寸分布。

多角度光散射检测器：常与SEC或FFF系统联机使用，配备多个固定角度的散射光探测器，用于绝对分子量测定。

高效液相色谱系统：集成尺寸排阻色谱柱、紫外/荧光检测器等，用于基于尺寸的分离和初步定量分析。

分析型超速离心机：配备光学检测系统（吸收或干涉），能在高速离心场下精确分析蛋白质的沉降行为。

场流分离系统：由分离通道、泵系统和检测器组成，利用垂直于流动方向的场力实现温和分离。

纳米颗粒跟踪分析仪：集成激光光源、高灵敏度相机和专用分析软件，可实时观察和统计纳米颗粒。

紫外-可见分光光度计：基础设备，用于测量溶液浊度、蛋白质浓度以及某些聚集相关的光谱变化。

荧光光谱仪：用于执行基于染料的聚集检测实验，以及测量蛋白质自身色氨酸荧光的淬灭来监测构象变化。

傅里叶变换红外光谱仪：配备ATR附件，可快速对液态或固态蛋白质样品进行二级结构分析。

差示扫描量热仪：通过精确控制温度并测量热流变化，直接测定蛋白质的热变性温度与焓值，评估其构象稳定性。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件