多肽钙粘蛋白信号通路激活分析

检测项目

钙粘蛋白胞外域结合活性：评估多肽钙粘蛋白同源或异源二聚化能力，反映其初始激活的相互作用基础。

连环蛋白（β-catenin）结合与募集：检测钙粘蛋白胞内域与β-catenin的结合强度，是经典Wnt通路关联活性的关键指标。

p120-连环蛋白（p120-catenin）结合状态：分析p120与钙粘蛋白近膜区的结合，关乎复合体稳定性与Rho GTPase调控。

酪氨酸磷酸化水平（如β-catenin Tyr磷酸化）：定量特定酪氨酸位点的磷酸化程度，与复合体解离和信号转导直接相关。

丝氨酸/苏氨酸磷酸化水平：监测影响蛋白稳定性和转录活性的关键磷酸化事件，如β-catenin的Ser/Thr位点。

胞内钙离子浓度波动：检测信号通路激活引发的瞬时或持续钙离子内流变化，是“钙粘蛋白”功能的核心体现。

下游效应分子LEF/TCF转录活性：通过报告基因系统评估β-catenin入核后启动靶基因转录的效率。

Rho家族GTP酶（RhoA， Rac1， Cdc42）活性：测定这些细胞骨架调节因子的GTP结合态比例，反映其对细胞形态和运动的调控。

粘着斑激酶（FAK）与SRC家族激酶活性：评估这些非受体酪氨酸激酶的活化状态，连接粘附信号与生长因子通路。

细胞连接完整性评估：通过电阻抗或染料扩散实验等功能性检测，量化细胞间粘附的紧密程度。

检测范围

经典钙粘蛋白（如E-cadherin， N-cadherin）：主要在上皮细胞和神经细胞中表达，介导同型粘附，是研究最广泛的亚类。

非经典钙粘蛋白（如7D型钙粘蛋白）：具有多次跨膜结构，在平面细胞极性等特定发育过程中发挥关键作用。

原钙粘蛋白（Protocadherin）：庞大亚家族，尤其在神经系统特异性识别和神经元回路形成中至关重要。

钙粘蛋白相关受体（如FAT， Dachsous）：参与Hippo等大型信号通路的调控，影响器官大小和细胞增殖。

多种哺乳动物细胞系：包括上皮来源（如MDCK， MCF-7）、内皮细胞、成纤维细胞及转化细胞系。

原代培养细胞：如原代角质形成细胞、神经元、心肌细胞等，更能反映生理状态下的通路活性。

动物组织样本：从小鼠、大鼠等模式生物中获取的胚胎或成体组织，用于在体分析。

三维培养体系（如类器官、球体）：模拟体内组织结构，用于研究空间维度下的钙粘蛋白信号网络。

肿瘤组织与转移灶样本：重点分析上皮-间质转化（EMT）过程中钙粘蛋白信号通路的异常改变。

发育过程中的特定时空区域：如果蝇胚胎、斑马鱼幼体等，用于研究通路在形态发生中的动态变化。

检测方法

免疫共沉淀与Western Blotting：标准方法用于验证钙粘蛋白与连环蛋白等胞内配体的直接相互作用。

酶联免疫吸附测定：定量检测溶液或裂解液中特定磷酸化钙粘蛋白或β-catenin的含量。

免疫荧光与共聚焦显微镜术：可视化钙粘蛋白复合体在细胞连接处的定位、聚集及共定位情况。

荧光共振能量转移/生物发光共振能量转移：在活细胞中实时、定量检测分子间相互作用的纳米级距离变化。

Pull-down assay（GST/RBD）：利用GST融合蛋白或Rho结合域特异性下拉并检测活性态Rho GTPase。

双荧光素酶报告基因检测：将含有TCF/LEF结合元件的报告质粒转染细胞，精确量化下游转录活性。

流式细胞术：对悬浮细胞或酶解为单细胞的贴壁细胞进行表面钙粘蛋白表达量及内吞的快速统计分析。

钙离子成像技术：使用Fluo-4， Fura-2等荧光染料或GCaMP钙指示蛋白，实时监测胞内钙信号动态。

原子力显微镜单分子力谱：在纳米尺度直接测量单个钙粘蛋白分子间的结合力与动力学参数。

转录组测序与生物信息学分析：全基因组范围筛选钙粘蛋白信号通路激活或抑制后的差异表达基因集。

检测仪器设备

激光扫描共聚焦显微镜：高分辨率三维成像核心设备，用于亚细胞定位和共定位分析。

全内反射荧光显微镜：专用于观察细胞膜附近（约100nm内）的分子事件，如粘附斑动态。

流式细胞仪：配备多激光器和检测器，用于快速、多参数分析细胞群体中信号分子的表达与修饰。

多功能酶标仪：具备光吸收、荧光、化学发光、时间分辨荧光等检测模式，适用于各类ELISA和报告基因实验读数。

蛋白质印迹系统：包括电泳、转膜、成像模块，是检测蛋白质表达与修饰的基础平台。

实时荧光定量PCR仪：精确量化钙粘蛋白信号通路下游靶基因的mRNA转录水平变化。

活细胞工作站/高内涵成像系统：整合温控、CO2控制和自动显微成像，用于长时间、多视野的动态过程追踪与定量分析。

原子力显微镜：配备特殊探针和液体池，可在生理条件下进行单分子水平的相互作用力测量。

钙离子成像专用系统：包含高速CCD相机、激发光源和专用软件，用于捕捉快速的钙离子瞬变信号。

超高效液相色谱-串联质谱联用仪：用于磷酸化蛋白质组学分析，全面鉴定和定量信号通路中的磷酸化位点及修饰动力学。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件