急性期反应实时荧光定量分析

检测项目

C-反应蛋白（CRP）mRNA：经典的急性期反应蛋白，其基因表达水平是评估急性炎症和组织损伤的灵敏指标。

血清淀粉样蛋白A（SAA）mRNA：在急性期反应中浓度急剧升高，对病毒感染和某些慢性炎症具有重要提示意义。

α1-酸性糖蛋白（AGP）mRNA：一种主要的急性期反应蛋白，其水平升高与炎症活动度密切相关。

结合珠蛋白（HP）mRNA：在溶血和炎症状态下表达上调，有助于评估炎症程度和血管内溶血。

纤维蛋白原（FIB）mRNA：不仅是凝血因子，也是重要的急性期反应蛋白，其表达反映炎症和应激状态。

补体C3 mRNA：补体系统关键成分，在急性期反应中合成增加，参与免疫防御和炎症反应。

白细胞介素-6（IL-6）mRNA：关键的促炎细胞因子，是诱导肝脏产生急性期反应蛋白的主要调节因子。

肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA：重要的炎症介质，在急性期反应的启动中发挥核心作用。

降钙素原（PCT）mRNA：在严重细菌感染和脓毒症时特异性高表达，是鉴别细菌感染的重要分子标志物。

脂多糖结合蛋白（LBP）mRNA：参与机体对革兰氏阴性菌感染的识别与应答，其表达水平与内毒素血症相关。

检测范围

细菌与病毒感染鉴别诊断：通过PCT、CRP等基因表达谱的差异，辅助区分细菌性和病毒性感染。

脓毒症与全身炎症反应综合征（SIRS）监测：动态监测多种急性期反应基因，评估全身性感染的严重程度和预后。

自身免疫性疾病活动度评估：如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮等疾病活动期的炎症水平监测。

手术后感染与并发症预警：术后早期检测相关基因表达变化，预警手术部位感染或全身并发症。

创伤及烧伤后应激反应评估：量化机体在严重创伤或烧伤后的急性期反应强度。

心血管疾病风险预测：检测如CRP等低水平慢性炎症标志物基因表达，评估动脉粥样硬化等心血管风险。

肿瘤相关恶病质与炎症状态监测：评估肿瘤患者体内的系统性炎症反应，与恶病质发生发展相关。

器官移植后排异反应监测：作为非特异性炎症指标，辅助判断移植后的急性排斥反应。

药物疗效评价：通过治疗前后急性期反应基因表达量的变化，客观评价抗炎或免疫抑制药物的疗效。

基础医学研究：用于研究急性期反应的分子调控机制、信号通路及新标志物的发现。

检测方法

样本采集与处理：采集全血、血清、血浆或特定组织，使用PAXgene管等专用容器保存RNA，防止降解。

总RNA提取：采用柱式法或磁珠法从样本中高效提取高纯度、完整性好的总RNA。

RNA浓度与纯度测定：使用微量分光光度计测定RNA在260nm/280nm处的吸光度值，评估浓度和纯度。

逆转录合成cDNA：以提取的总RNA为模板，利用逆转录酶和随机引物或Oligo(dT)引物合成第一链cDNA。

实时荧光定量PCR引物/探针设计：针对目标基因的保守区域，设计特异性引物和TaqMan探针或SYBR Green兼容引物。

qPCR反应体系配制：将cDNA模板、特异性引物/探针、荧光染料或探针、DNA聚合酶及缓冲液精确混合。

实时荧光定量PCR扩增：将反应体系置于实时荧光定量PCR仪中，进行热循环扩增并实时采集荧光信号。

标准曲线绘制与定量分析：使用已知浓度的标准品梯度稀释后同时扩增，绘制标准曲线，据此计算未知样本中目标基因的绝对或相对表达量。

内参基因校正：选用GAPDH、β-actin等持家基因作为内参，对目标基因的表达量进行归一化处理，消除样本间差异。

数据分析与报告生成：使用仪器配套软件分析Ct值或荧光增长曲线，计算基因表达差异倍数，生成标准化检测报告。

检测仪器设备

实时荧光定量PCR仪：核心设备，用于进行DNA扩增并实时监测荧光信号变化，如ABI QuantStudio系列、Bio-Rad CFX系列等。

核酸提取仪：自动化完成样本的裂解、结合、洗涤和洗脱步骤，实现高通量、标准化的RNA提取。

微量分光光度计/纳米滴度计：用于快速、微量地检测所提取RNA的浓度和纯度，仅需1-2μL样本。

高速冷冻离心机：用于样本预处理、RNA提取过程中的离心步骤，确保沉淀完全和相分离。

超净工作台/生物安全柜：提供无菌无尘的操作环境，防止样本污染并保护操作人员安全。

涡旋振荡器：用于快速混匀微量离心管中的液体反应体系，确保反应成分均匀分布。

微量移液器及无菌吸头：精确移取微量液体（μL至mL级别）的关键工具，需定期校准以保证准确性。

PCR板/管密封仪：用于在qPCR反应前对96孔板或8联管进行光学膜热密封，防止蒸发和污染。

-80°C超低温冰箱：用于长期保存提取的RNA、cDNA及引物探针等关键试剂，保证其稳定性。

数据分析计算机及软件：安装仪器配套的正规分析软件（如QuantStudio Design & Analysis），用于运行设置、数据采集和结果分析。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件