信号通路干扰测试

检测项目

MAPK/ERK通路活性检测：通过检测磷酸化ERK1/2蛋白水平，评估生长因子等刺激下该关键增殖通路的激活状态。

PI3K/Akt通路活性检测：测量磷酸化Akt（Ser473或Thr308）的表达，是评估细胞存活、代谢与生长信号的核心指标。

JAK/STAT通路干扰测试：检测STAT蛋白（如STAT3）的磷酸化及核转位情况，常用于免疫调节和肿瘤相关研究。

Wnt/β-catenin通路活性分析：通过检测β-catenin的稳定性、亚细胞定位及下游靶基因表达，评估Wnt信号强度。

NF-κB通路核转位检测：观察p65等亚基从胞质到胞核的转位过程，是炎症与应激反应的关键读数。

TGF-β/Smad通路信号评估：检测Smad2/3的磷酸化及与Smad4的复合物形成，评价细胞分化与纤维化信号。

Hedgehog通路功能测试：通过检测Gli转录因子活性或Ptch1/Smo表达变化，评估该发育相关通路的扰动。

Notch通路胞内域释放检测：监测Notch受体蛋白水解后释放的胞内结构域（NICD），反映Notch信号激活。

凋亡通路关键蛋白检测：分析Caspase-3/7的酶活性和PARP的剪切情况，定量评价细胞凋亡程度。

自噬流标志物LC3-II定量：通过Western Blot或荧光显微镜量化LC3-II蛋白水平或斑点形成，评估自噬通量的变化。

检测范围

小分子抑制剂/激动剂筛选：评估候选化合物对特定信号通路靶点的抑制或激活效能，用于药物早期发现。

生物制剂功能验证：测试抗体、重组蛋白或细胞因子等对目标通路的影响，确认其生物活性与作用机制。

基因功能缺失研究：应用siRNA、shRNA或CRISPR-Cas9敲低/敲除特定基因后，分析其对相关信号网络的扰动。

基因过表达功能研究：通过转染使特定基因（如激酶、受体）过表达，观察其对下游信号的组成性激活效应。

肿瘤细胞耐药机制解析：比较耐药与敏感细胞株在药物处理下关键存活或增殖通路的差异活化状态。

免疫细胞激活状态评估：在免疫刺激或抑制条件下，检测T细胞、巨噬细胞等内部信号通路的动态变化。

发育生物学模型分析：在模式生物（如果蝇、斑马鱼）或干细胞分化模型中，研究关键发育信号通路的时空调控。

环境毒理学评价：检测环境污染物或纳米材料对细胞应激通路（如氧化应激、DNA损伤应答）的干扰作用。

中药复方或多靶点药物机理探索：系统分析复杂混合物对多个信号通路的协同或拮抗影响，阐明其多靶点作用。

细胞命运重编程监控：在诱导多能干细胞（iPSC）等重编程过程中，实时监测多能性相关核心通路的激活时序。

检测方法

蛋白质免疫印迹（Western Blot）：利用特异性抗体检测信号通路中关键蛋白的总量及磷酸化修饰水平，是半定量标准方法。

酶联免疫吸附测定（ELISA）：采用夹心法原理，定量检测细胞裂解液或血清中特定磷酸化蛋白或信号分子的浓度。

免疫荧光染色与共聚焦显微镜：通过荧光标记抗体可视化目标蛋白在细胞内的定位与丰度，特别适用于核转位观察。

流式细胞术磷酸化蛋白检测：使用荧光抗体对固定透化的单细胞进行染色，高通量分析细胞群体内信号通路的异质性。

报告基因活性测定：将通路特异性响应元件驱动荧光素酶或GFP的载体转染细胞，通过发光或荧光强度间接反映通路活性。

蛋白质免疫共沉淀（Co-IP）与质谱分析：利用抗体抓取目标蛋白及其互作复合物，用于研究信号传导中的蛋白质相互作用网络。

实时荧光定量PCR（qPCR）：检测信号通路下游特异性靶基因的mRNA表达变化，作为通路功能性输出的重要指标。

高通量磷酸化蛋白质组学：基于质谱技术大规模、无偏地鉴定和定量全细胞或特定亚细胞部位中数千个磷酸化位点的变化。

微流控芯片单细胞分析：在微流控平台上实现对单细胞的捕获、刺激与裂解，耦合高灵敏检测技术解析单细胞信号动力学。

原位邻近连接技术（PLA）：在细胞原位高特异性地检测蛋白质相互作用、修饰或寡聚化，提供空间互作信息。

检测仪器设备

化学发光成像系统：用于捕获Western Blot、ELISA等实验中化学发光信号的成像和定量分析。

多功能酶标仪：具备光吸收、荧光和化学发光检测模块，可进行ELISA、报告基因、细胞活性等多种板式检测。

激光扫描共聚焦显微镜：高分辨率、层析成像，是进行免疫荧光染色样品亚细胞定位观察的核心设备。

流式细胞仪：配备多激光器和检测器，能够对经过荧光抗体标记的单细胞进行高速、多参数的定量分析。

实时荧光定量PCR仪：精确控制温度循环并监测荧光信号，用于定量分析通路下游基因的转录水平变化。

高内涵细胞成像分析系统：自动化显微镜与图像分析软件结合，可对多孔板中的细胞进行高通量、多指标的形态与荧光分析。

液相色谱-串联质谱联用仪（LC-MS/MS）：进行磷酸化蛋白质组学研究的核心设备，用于复杂样品中磷酸化肽段的分离、鉴定与定量。

蛋白质电泳与转印系统：包括电泳槽、电源和湿转/半干转转印仪，是完成Western Blot样品分离和膜转移的基础设备。

细胞培养与处理工作站：提供无菌操作环境的生物安全柜、恒温培养箱以及用于药物刺激的加药系统，保障实验前处理标准化。

单细胞测序平台：如10x Genomics系统，能够在单细胞分辨率下解析信号扰动后细胞的转录组或表观组全景变化。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件