多肽钙粘蛋白质谱分析实验

检测项目

多肽序列鉴定：通过质谱数据解析，确定钙粘蛋白酶解后产生的多肽的氨基酸序列。

翻译后修饰鉴定：检测钙粘蛋白上发生的磷酸化、糖基化、乙酰化等修饰类型与位点。

蛋白相对定量：比较不同样本（如正常与病变组织）中钙粘蛋白的表达丰度差异。

绝对定量分析：使用同位素标记的标准肽段，精确测定样品中钙粘蛋白的绝对含量。

蛋白相互作用位点分析：鉴定钙粘蛋白胞外域与配体结合或胞内域与连环蛋白结合的关键肽段区域。

蛋白异构体分析：区分和鉴定由于选择性剪接产生的不同钙粘蛋白亚型。

二硫键定位：确定钙粘蛋白胞外域中维持结构稳定的二硫键的具体连接位置。

蛋白降解片段分析：检测在病理状态下（如癌症转移）钙粘蛋白被蛋白酶切割产生的特异性片段。

复合物组成鉴定：通过免疫共沉淀结合质谱，分析钙粘蛋白粘附复合物中的其他成员蛋白。

突变与变异体检测：发现钙粘蛋白基因突变或单核苷酸多态性导致的氨基酸序列变异。

检测范围

经典钙粘蛋白（E-cadherin, N-cadherin, P-cadherin）：主要参与细胞间粘附，是上皮-间质转化研究的核心靶标。

原钙粘蛋白：包括聚类和非聚类原钙粘蛋白，涉及神经发育和细胞识别。

桥粒钙粘蛋白（Desmoglein, Desmocollin）：特异性存在于桥粒结构中，维持组织机械强度。

钙粘蛋白相关受体（如FAT、Dachsous）：参与调控细胞极性、生长和形态发生。

截短型钙粘蛋白：在多种癌症中发现的、失去跨膜区或胞内域的异常剪切变体。

可溶性钙粘蛋白片段：脱落至血液或细胞培养上清中的胞外域片段，可作为潜在生物标志物。

不同物种来源的钙粘蛋白：涵盖人类、小鼠、大鼠等模式生物的钙粘蛋白家族成员。

不同组织或细胞系来源的样品：包括肿瘤组织、正常组织、原代细胞及传代细胞系。

亚细胞组分中的钙粘蛋白：如膜组分、细胞连接处富集组分或胞内囊泡中的钙粘蛋白。

翻译后修饰特异性富集样本：通过抗体富集获得的特定修饰（如磷酸化）钙粘蛋白样品。

检测方法

胰蛋白酶酶解：使用胰蛋白酶对纯化的钙粘蛋白进行特异性切割，生成适合质谱分析的多肽混合物。

液相色谱-串联质谱法：核心分析方法，通过液相色谱分离多肽，再由串联质谱进行序列与修饰解析。

数据依赖性采集：最常用的质谱扫描模式，自动选择丰度最高的离子进行碎裂，用于发现性分析。