变构效应分子探针测试

检测项目

变构位点结合亲和力测定：定量评估探针分子与目标蛋白变构位点之间的结合强度，通常以解离常数（Kd）表示。

变构效应功能验证：验证探针结合后对目标蛋白正构位点活性或构象产生的功能性影响，如激活或抑制。

选择性与特异性分析：评估探针分子对目标蛋白家族中不同亚型或相关蛋白的选择性，确保其作用靶点明确。

构象变化动力学监测：实时监测探针结合诱导的蛋白质构象变化速率和过程，揭示变构调节的动态机制。

细胞膜通透性测试：评估探针分子穿透细胞膜进入胞内并作用于靶标蛋白的能力，是细胞水平研究的前提。

细胞活性与毒性评估：在细胞模型中测试探针对细胞活力、增殖及潜在毒性的影响，评估其生物相容性。

信号通路扰动分析：探究探针介入后，对下游相关信号通路关键节点分子表达或活性的影响。

竞争结合实验：通过已知变构调节剂与待测探针的竞争实验，验证其结合位点的同一性或差异性。

热稳定性变化检测：利用热位移分析等技术，检测探针结合后目标蛋白热稳定性的改变，间接反映结合事件。

体内药代动力学初步研究：在动物模型中初步评估探针的吸收、分布、代谢和排泄性质，为后续开发提供依据。

检测范围

G蛋白偶联受体（GPCRs）：针对GPCR跨膜结构域或胞内区的变构位点进行探针开发和功能测试。

激酶家族蛋白：涵盖酪氨酸激酶、丝氨酸/苏氨酸激酶等，测试探针对其非ATP结合变构口袋的调节作用。

核受体：针对核受体的变构结合域，测试探针对其转录激活功能的调节能力。

离子通道蛋白：评估探针对电压门控或配体门控离子通道变构门控机制的调节特性。

表观遗传调控蛋白：如组蛋白修饰酶、去修饰酶及阅读器结构域的非活性位点探针测试。

代谢酶与转运蛋白：针对关键代谢酶或物质转运蛋白的变构调节位点进行探针筛选与验证。

细胞凋亡相关蛋白：测试探针对Bcl-2家族等凋亡调控蛋白变构相互作用的干扰或促进效果。

泛素连接酶与去泛素化酶：开发针对此类酶非催化位点的探针，以调控蛋白质降解过程。

病原体靶标蛋白：针对细菌、病毒的特异性变构靶点开发探针，用于新型抗感染药物研究。

支架蛋白与信号复合物：评估探针对大型信号复合物组装或支架蛋白构象的变构调控作用。

检测方法

表面等离子共振技术（SPR）：实时、无标记地监测探针与固定化靶蛋白之间的结合动力学参数。

等温滴定量热法（ITC）：通过测量结合过程中的热变化，直接获得结合常数、焓变和熵变等热力学参数。

荧光偏振/各向异性（FP/FA）：利用荧光标记的探针或配体，通过偏振光变化检测结合事件，适用于高通量筛选。

核磁共振波谱法（NMR）：在原子分辨率水平探测蛋白质与探针结合前后的构象变化，尤其适用于溶液态研究。

X射线晶体衍射法：解析探针-蛋白复合物的高分辨率三维结构，直观揭示结合模式和引起的构象重排。

细胞热位移分析（CETSA）：在完整细胞或裂解液中评估探针结合对靶蛋白热稳定性的影响，反映细胞内靶点结合。

生物膜干涉技术（BLI）：一种基于光干涉的无标记生物分子相互作用分析技术，用于快速测定结合动力学。

荧光共振能量转移（FRET）：利用荧光供体-受体对，检测由探针结合引起的蛋白质内部或分子间距离变化。

AlphaScreen/AlphaLISA 均相检测法：基于珠状微粒的能量转移，用于均相条件下高灵敏度的结合或功能检测。

分子对接与动力学模拟：计算机辅助方法，预测探针的结合模式、亲和力并进行虚拟筛选，指导实验设计。

检测仪器设备

表面等离子共振仪（如Biacore系列）：进行实时、高精度的生物分子相互作用动力学分析的专用仪器。

等温滴定量热仪（如MicroCal ITC）：用于精确测量生物分子结合过程中热力学变化的精密量热设备。

多功能酶标仪（带荧光偏振模块）：具备荧光偏振、时间分辨荧光等多种检测模式的微孔板阅读器，支持高通量筛选。

高场核磁共振波谱仪（如600 MHz及以上）：用于蛋白质结构解析和动态过程研究的大型分析仪器。

X射线单晶衍射仪

蛋白质结晶机器人：自动化执行蛋白质结晶条件筛选的液体处理系统，用于获取高质量晶体。

生物膜干涉系统（如Octet系列）：基于BLI技术，可同时进行多通道、无标记实时相互作用分析的平台。

实时荧光定量PCR仪：用于检测探针处理后下游基因表达水平的变化，评估其对信号通路的影响。

高内涵细胞成像分析系统：自动化获取和分析细胞图像，用于评估探针的细胞表型、定位及毒性等多参数信息。

液相色谱-质谱联用仪（LC-MS/MS）：用于复杂生物样品中探针及其代谢产物的定性与定量分析，以及蛋白质组学分析。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件