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    质谱结合常数测定

    发布时间:2026-03-18

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    检测概要:本检测详细介绍了质谱技术在生物分子相互作用结合常数测定中的应用。文章系统阐述了该技术的核心检测项目、广泛的检测范围、主流及前沿的检测方法,以及关键的仪器设备构成。内容旨在为研究人员提供一份关于利用质谱进行定量相互作用分析的全面技术参考。

检测项目

蛋白质-小分子配体结合常数:测定药物候选分子与靶标蛋白之间的亲和力,为药物筛选提供关键数据。

蛋白质-多肽相互作用强度:量化信号肽、抑制剂多肽等与受体或酶的结合能力。

蛋白质-蛋白质复合物稳定性:评估复合物在溶液中的解离程度,反映相互作用的强弱。

抗体-抗原亲和力:精确测量单克隆抗体或多克隆抗体对其特异性抗原的结合常数。

核酸-小分子结合参数:研究小分子药物与DNA或RNA特定序列的结合强度与特异性。

蛋白质-金属离子结合能力:测定金属辅因子(如锌、铁、钙离子)与金属结合蛋白的亲和常数。

酶-底物/抑制剂解离常数:在非酶活条件下,直接测量酶与底物类似物或抑制剂的结合平衡常数。

糖蛋白-凝集素相互作用:分析糖基化修饰的蛋白质与特定凝集素之间的结合亲和力。

共价结合物的修饰化学计量:确定共价抑制剂与靶蛋白的结合比例,验证结合位点饱和度。

竞争性结合实验参数:通过竞争实验,测定未知配体相对于已知高亲和力配体的相对结合常数。

检测范围

小分子药物候选物:涵盖分子量小于1000 Da的合成化合物、天然产物及其衍生物。

多肽与寡聚核苷酸:包括长度在10-50个残基之间的生物活性多肽和短链核酸。

完整蛋白质:适用于从多肽到大型蛋白质复合物(如抗体、酶、受体)的广泛分子量范围。

翻译后修饰蛋白:可检测磷酸化、糖基化、乙酰化等修饰对蛋白质相互作用的影响。

膜蛋白模拟体系:结合去垢剂胶束或纳米盘,研究膜蛋白与配体在类膜环境中的相互作用。

核酸靶标:包括双链DNA、单链DNA、RNA以及G-四链体等特殊二级结构。

金属离子与辅因子:检测范围覆盖生命体系中常见的过渡金属离子和有机辅因子。

弱至中等强度相互作用:特别适合测量传统方法难以检测的毫摩尔(mM)至微摩尔(μM)级亲和力。

动态复合物体系:能够分析快速结合与解离的动态相互作用,捕捉瞬态结合信息。

复杂生物样品粗提物:在特定方法下,可从细胞裂解液等复杂混合物中直接筛选和测定结合配体。

检测方法

非变性质谱法:在温和电离条件下保持非共价复合物的完整性,通过信号强度比直接计算结合常数。

氢氘交换质谱法:通过测量结合前后蛋白质氢氘交换速率的变化,间接推算出结合常数和识别结合位点。

检测仪器设备

<强|纳升电喷雾电离源

<强|自动进样与液相色谱系统

<强|氢氘交换自动化平台

<强|非变性色谱柱

<强|超滤离心装置

<强|数据处理与拟合软件:专用的软件包用于去卷积质谱图谱、计算复合物质量、拟合滴定曲线并最终计算出准确的结合常数(Kd)。

检测流程

1、咨询:提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品,安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据,编写报告草件,确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件

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