膜蛋白相互作用组学实验

检测项目

膜蛋白-膜蛋白直接相互作用：鉴定跨膜结构域或胞外/胞内结构域之间形成的稳定复合物，是理解信号转导和物质转运的基础。

膜蛋白-脂质相互作用：分析膜蛋白与特定磷脂（如PIP2、胆固醇）的结合，揭示脂质环境对蛋白功能与定位的调控。

膜蛋白-细胞骨架相互作用：检测膜蛋白与肌动蛋白、微管或中间丝等骨架组分的连接，研究细胞形态与运动的分子机制。

膜蛋白-可溶性胞质蛋白相互作用：鉴定与膜蛋白胞内域结合的衔接蛋白、激酶或酶，描绘下游信号通路网络。

膜蛋白-细胞外基质/配体相互作用：分析整合素等膜蛋白与纤连蛋白、胶原或生长因子等胞外分子的结合。

膜蛋白复合物组成与 stoichiometry：确定特定功能复合物（如受体异源二聚体）的精确亚基组成和化学计量比。

相互作用亲和力与动力学参数：定量测定相互作用的解离常数（Kd）、结合速率（kon）与解离速率（koff）。

翻译后修饰依赖的相互作用：研究磷酸化、泛素化、糖基化等修饰如何动态调节膜蛋白的互作网络。

空间邻近性与瞬时相互作用：捕获细胞膜上空间邻近但非稳定结合的蛋白，反映微域内的动态组织。

疾病或刺激条件下的互作变化：比较正常与病理状态（或药物处理前后）膜蛋白相互作用组的差异，寻找治疗靶点。

检测范围

整合膜蛋白（单次/多次跨膜）：涵盖具有一个或多个跨膜螺旋的蛋白，如G蛋白偶联受体、离子通道和转运体。

脂锚定膜蛋白：包括通过GPI锚、豆蔻酰化或棕榈酰化等方式锚定在膜上的蛋白质。

外周膜蛋白：检测通过静电或疏水作用暂时与膜脂或膜蛋白结合的蛋白质。

质膜及其微域（脂筏）：聚焦于细胞质膜，并可进一步细分研究富含胆固醇和鞘脂的脂筏区域的互作。

细胞器膜蛋白（内质网、高尔基体、线粒体等）：扩展至各种细胞器的膜系统，研究其特异的膜蛋白互作网络。

全细胞水平的膜蛋白组互作：在全局范围内系统性鉴定所有膜相关蛋白质的相互作用伴侣。

特定细胞类型的膜互作组：针对神经元、免疫细胞、上皮细胞等特化细胞的膜蛋白互作进行研究。

不同物种的膜系统：从酵母、植物到哺乳动物细胞，覆盖不同模式生物的膜互作组学。

动态时间范围内的互作事件：从毫秒级的瞬时接触到持续数小时的稳定结合，覆盖不同时间尺度的相互作用。

生理与病理状态下的差异范围：比较发育不同阶段、细胞周期各期或疾病模型与健康状态下的互作组差异。

检测方法

亲和纯化-质谱联用技术：将靶标膜蛋白进行亲和标签标记并纯化，随后用质谱鉴定其共纯化的相互作用伴侣，是主流方法之一。

邻近依赖生物素标记技术：利用工程酶（如BioID、TurboID）在活细胞内对靶标膜蛋白邻近的蛋白质进行生物素标记，再通过链霉亲和素纯化与质谱鉴定。

交联质谱技术：使用化学交联剂共价连接相互作用的蛋白质，通过质谱分析交联肽段，获得相互作用界面和空间结构信息。

表面等离子共振技术：实时、无标记地测量膜蛋白（通常重组并固定在芯片上）与溶液中分析物相互作用的动力学和亲和力。

荧光共振能量转移/生物发光共振能量转移：利用荧光/发光蛋白对，在活细胞JianCe测纳米尺度内膜蛋白间的距离变化，验证直接相互作用。

免疫共沉淀与 pull-down 实验：使用特异性抗体或标签从去垢剂溶解的膜提取物中捕获靶蛋白及其互作复合物，结合WB或MS分析。

双杂交系统（膜酵母双杂交等）：将膜蛋白拆分融合到报告系统的DNA结合域和激活域，在核膜或特殊系统JianCe测其相互作用。

蛋白质片段互补技术：将报告蛋白（如荧光蛋白、酶）拆分成两个片段，分别融合到待测膜蛋白上，通过相互作用恢复报告信号。

纳米盘技术与重组体系互作分析：将目标膜蛋白重组到纳米盘（类膜环境）中，用于研究其在更接近天然状态下的体外相互作用。

TIRF显微镜与单分子追踪：利用全内反射荧光显微镜观察膜表面单分子行为，分析共定位、共扩散等互作特征。

检测仪器设备

高分辨率质谱仪：如Orbitrap系列、Q-TOF等，用于精确鉴定和定量互作蛋白质及翻译后修饰的核心设备。

液相色谱系统：与质谱联用的纳流或高效液相色谱，用于复杂肽段混合物的分离。

表面等离子共振仪：如Biacore系列，专门用于实时、无标记的分子互作动力学分析。

共聚焦/超分辨率荧光显微镜：用于验证互作的空间共定位，特别是STORM/PALM等技术可突破衍射极限。

全内反射荧光显微镜：专门用于高信噪比地观察细胞膜附近（约100nm内）的荧光标记分子及其互作动态。

蛋白质纯化系统：包括FPLC、AKTA等，用于制备高纯度的膜蛋白样品或互作复合物。

细胞破碎与分馏设备：如高压均质机、超声破碎仪、差速离心机等，用于制备完整的膜组分。

生物分子相互作用分析仪：如微量热泳动仪、等温滴定量热仪，用于溶液中的亲和力测量。

自动化液体处理工作站：用于高通量的样品制备、移液和反应设置，提高实验重复性和通量。

高性能计算集群与生物信息学软件：处理海量质谱数据，进行数据库搜索、互作网络构建和可视化分析的必备工具。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件