腺苷二磷酸核糖代谢通路分析

检测项目

ADP-核糖基化修饰水平检测：定量检测蛋白质上ADP-核糖基化修饰的总体水平，反映通路全局活性。

聚(ADP-核糖) (PAR)链长度分析：测定由PARP酶催化生成的PAR链的平均长度与复杂性，与酶活性密切相关。

特异性底物蛋白鉴定：识别在特定生理或病理状态下发生ADP-核糖基化修饰的靶蛋白。

修饰位点精确定位：在已鉴定的靶蛋白上，精确鉴定发生ADP-核糖基化修饰的氨基酸残基（如天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸等）。

PARP家族酶活性测定：分别检测不同PARP家族成员（如PARP1， PARP2， PARP3等）的催化活性。

去修饰酶（如PARG， ARH3）活性测定：评估负责水解PAR链或单ADP-核糖基的去修饰酶的活性。

代谢中间产物定量：定量检测细胞内NAD+（ADP-核糖基的供体）、ADP-核糖、游离PAR等关键代谢分子浓度。

ADP-核糖基化修饰类型区分：区分单ADP-核糖基化、聚ADP-核糖基化以及不同链分支结构的修饰类型。

与DNA损伤应答关联分析：检测DNA损伤刺激下，PAR在损伤位点的快速形成与清除动力学。

细胞定位与共定位分析：通过成像技术观察ADP-核糖基化修饰在细胞核、核仁、线粒体等亚细胞结构的分布。

检测范围

体外重组酶学分析：使用纯化的PARP酶、底物蛋白和NAD+，在体外重建并分析修饰反应。

细胞裂解液分析：从培养的细胞系中提取总蛋白，分析内源性ADP-核糖基化修饰的整体变化。

亚细胞组分分析：分离细胞核、线粒体、细胞质等组分，研究修饰通路的区室化特征。

免疫沉淀复合物分析：通过免疫沉淀富集特定蛋白或其修饰形式，分析与之结合的修饰或互作蛋白。

组织样本分析：从动物或临床组织样本JianCe测ADP-核糖基化通路相关分子的表达与活性。

原代细胞与干细胞分析：在非永生化细胞模型中研究该通路在分化、衰老等过程中的作用。

细菌与病毒感染模型：研究病原体效应蛋白对宿主ADP-核糖基化通路的劫持或调节。

基因编辑细胞系：在PARP或去修饰酶基因敲除/敲入的细胞中，进行功能缺失或获得性研究。

药物处理与抑制剂筛选：评估PARP抑制剂等药物对通路活性的影响，用于药效学评价。

发育与疾病动物模型：在癌症、神经退行性疾病、炎症等动物模型中开展在体通路分析。

检测方法

免疫印迹法：使用抗PAR、抗单ADP-核糖或抗特定修饰底物的抗体进行半定量检测。

酶联免疫吸附试验：采用ELISA试剂盒高灵敏度定量检测样品中的PAR或特定修饰水平。

点击化学标记法：利用可点击的NAD+类似物（如6-炔丙基-NAD+）进行代谢标记，通过荧光或生物素耦联进行高特异性检测。

质谱蛋白质组学：基于液相色谱-质谱联用技术，大规模鉴定和定量ADP-核糖基化修饰蛋白及位点。

亲和纯化与蛋白质芯片：使用ADP-核糖结合模块（如AF1521， WWE结构域）富集修饰蛋白，或使用芯片进行高通量筛选。

放射性标记法：使用放射性同位素标记的NAD+（如32P-NAD+）进行体外或体内标记，通过放射自显影检测。

荧光偏振/共振能量转移法：用于实时、均相检测PARP酶活性或蛋白质与ADP-核糖的相互作用。

免疫荧光/免疫组化染色：在细胞或组织原位可视化ADP-核糖基化修饰的空间分布。

高效液相色谱法：分离并定量细胞内NAD+、ADP-核糖等小分子代谢物。

毛细管电泳法：高效分离不同长度的PAR链，用于链长分布分析。

检测仪器设备

蛋白质免疫印迹系统：包括电泳仪、转膜仪和化学发光成像仪，用于常规免疫印迹分析。

酶标仪：用于读取ELISA、荧光偏振、吸光度等检测信号，进行高通量定量分析。

激光共聚焦显微镜：用于高分辨率采集免疫荧光样本图像，进行亚细胞定位和共定位分析。

液相色谱-质谱联用仪：是修饰组学研究的核心设备，用于精确鉴定修饰位点与定量分析。

高效液相色谱仪：配备紫外或荧光检测器，用于分离和定量小分子代谢物。

毛细管电泳仪：配备紫外或激光诱导荧光检测器，用于高分辨率分析PAR链。

实时荧光定量PCR仪：用于检测PARP家族基因及相关通路基因的mRNA表达水平。

微量分光光度计/纳米滴度计：用于快速、微量地测定核酸和蛋白质样品的浓度。

低温高速离心机：用于细胞、亚细胞组分的分离以及样品制备过程中的离心操作。

凝胶成像系统：用于对放射性标记、荧光标记或染色的凝胶进行图像采集和分析。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件