雄甾烯酮竞争法酶联免疫吸附试验

检测项目

雄甾烯酮（Androstenone）：一种主要存在于公猪脂肪和唾液中的类固醇信息素，是导致公猪膻味的关键物质。

5α-雄甾-16-烯-3α-醇：雄甾烯酮的还原代谢产物之一，同样具有强烈的气味贡献。

5α-雄甾-16-烯-3β-醇：雄甾烯酮的另一种立体异构代谢物，与膻味形成相关。

雄甾二烯酮（Androstadienone）：一种与雄甾烯酮结构相近的类固醇，可能作为交叉反应物被检测。

雄烯二酮：睾酮和雌激素的前体物质，在类固醇激素代谢通路中占有重要地位。

猪脂肪组织提取物：最常见的实际检测样本，用于评估猪肉及其制品的风味品质。

猪血清或血浆：用于活体筛查或监测体内雄甾烯酮的代谢水平。

唾液样本：非侵入性样本，可用于研究信息素分泌与动物行为的关系。

肉类加工产品：如香肠、火腿等，监控原料肉中雄甾烯酮的残留情况。

环境样本（如养殖场空气或水体）：用于评估信息素对动物群体行为或环境的影响。

检测范围

生猪育种筛选：通过检测公猪血液或唾液，早期筛选低膻味品系，优化育种方案。

屠宰后肉质分级：对胴体脂肪进行快速筛查，根据雄甾烯酮含量进行肉质等级划分。

食品安全监控：确保上市猪肉及其制品中令人不悦的膻味物质含量低于感官阈值。

肉类进出口检验检疫：作为国际贸易中一项重要的品质与安全检测指标。

饲料添加剂效果评估：评估某些饲料成分或添加剂对降低公猪膻味的效果。

动物行为学研究：探究雄甾烯酮作为信息素在猪群社会交往中的作用。

法医学与兴奋剂检测：在特定情况下，检测生物样本中此类内源性类固醇的异常水平。

环境生态学研究：监测养殖环境中类固醇信息素的分布与迁移。

食品加工工艺研究：研究不同加工、储存条件对肉中雄甾烯酮稳定性的影响。

临床内分泌研究（限动物）：作为研究猪只性发育和内分泌功能的参考指标之一。

检测方法

竞争性免疫反应原理：样本中的游离雄甾烯酮与包被在微孔板上的抗原竞争结合有限的酶标抗体。

微孔板包被：将雄甾烯酮与载体蛋白的偶联物固定于96孔聚苯乙烯酶标板孔内。

样本前处理：通常采用有机溶剂（如甲醇、己烷）从脂肪等样本中萃取目标物。

加样与孵育：将处理后的样本或标准品与酶标抗体溶液同时加入微孔，于37℃孵育。

洗涤步骤：孵育后弃去液体，使用洗涤缓冲液反复冲洗微孔，去除未结合物质。

酶底物显色：加入TMB等过氧化物酶底物溶液，酶催化底物产生蓝色产物。

终止反应：加入硫酸或磷酸等终止液，使蓝色转变为稳定的黄色。

吸光度测定：使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度值。

标准曲线绘制：以标准品浓度的对数为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

结果计算与分析：根据样本孔的吸光度值，从标准曲线上计算出其对应的浓度。

检测仪器设备

酶标仪（微孔板阅读器）：核心设备，用于测定微孔板在特定波长下的吸光度值。

洗板机：自动完成微孔板的洗涤步骤，确保洗涤的均一性和重复性。

恒温孵育箱：为抗原抗体反应提供稳定且精确的孵育温度（如37℃）。

微量移液器及吸头：用于精确加样，包括单道和多道移液器，范围覆盖1μL至1mL。

漩涡混合器：用于充分混匀样本、试剂或进行液液萃取。

离心机：用于分离样本中的不同相，如前处理后的有机相和水相。

分析天平：精确称量固体试剂或脂肪样本。

pH计：用于配制和校准各种缓冲溶液的酸碱度。

纯水系统：制备实验所需的超纯水，用于配制缓冲液、洗涤液等。

冰箱与冰柜：用于储存试剂盒、标准品、酶标抗体等生物试剂，通常需要2-8℃和-20℃条件。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件