代谢稳定性抑制实验

检测项目

CYP1A2抑制活性评估：评估待测化合物对细胞色素P450 1A2酶活性的抑制强度，该酶参与多种药物（如咖啡因、氯氮平）的代谢。

CYP2B6抑制活性评估：测定化合物对CYP2B6酶的抑制能力，此酶是依法韦仑、环磷酰胺等药物的主要代谢酶。

CYP2C8抑制活性评估：检测对CYP2C8酶的抑制作用，该酶负责紫杉醇、瑞格列奈等药物的代谢。

CYP2C9抑制活性评估：评估化合物对CYP2C9酶的抑制潜力，此酶是华法林、甲苯磺丁脲等药物的关键代谢酶。

CYP2C19抑制活性评估：测定对CYP2C19酶的抑制活性，该酶参与奥美拉唑、氯吡格雷等药物的代谢。

CYP2D6抑制活性评估：评估对CYP2D6酶的抑制强度，此酶是许多精神类药物（如氟西汀、可待因）的主要代谢酶。

CYP2E1抑制活性评估：检测化合物对CYP2E1酶的抑制作用，该酶主要代谢乙醇、对乙酰氨基酚等小分子。

CYP3A4/5抑制活性评估：评估对最重要的药物代谢酶CYP3A4/5的抑制能力，涉及超过50%的临床药物代谢。

时间依赖性抑制（TDI）筛选：检测化合物是否通过机制性抑制（如形成代谢中间体复合物）导致不可逆或准不可逆的酶抑制。

IC50/ Ki值测定：定量测定抑制剂的半数抑制浓度（IC50）或抑制常数（Ki），用于量化抑制效力和比较不同化合物的抑制潜力。

检测范围

新化学实体（NCEs）：在药物发现早期，对合成的新化学实体进行高通量筛选，评估其代谢抑制风险。

中药活性成分：评估从中药或天然产物中提取的单体化合物对CYP酶的抑制作用，预测其与西药联用的相互作用。

候选药物分子：在临床前开发阶段，对进入开发管线的候选药物进行系统全面的代谢抑制谱分析。

药物代谢产物：研究原形药物的主要代谢产物是否具有酶抑制活性，进行全面的安全性评估。

食品及保健品成分：检测常见食品添加剂、功能性成分（如柚皮苷、白藜芦醇）对药物代谢酶的潜在影响。

环境污染物：评估多环芳烃、重金属等环境污染物对肝脏代谢酶系统的干扰作用。

已上市药物再评价：对已上市药物进行深入的药物相互作用研究，补充或更新其药品说明书信息。

手性化合物对映体：分别评估手性药物的不同对映体对CYP酶的抑制差异，指导立体选择性研发。

药物制剂及辅料：研究制剂中的某些辅料或杂质是否会对代谢酶产生非预期的抑制作用。

联合用药方案：模拟临床联合用药场景，评估多种药物同时存在时对特定CYP酶的协同或叠加抑制效应。

检测方法

人肝微粒体温孵法：使用人肝微粒体作为酶源，与探针底物、辅因子及待测化合物共孵育，是经典的标准方法。

重组人CYP酶温孵法：利用表达单一特定CYP亚型的重组酶系统进行研究，结果特异性高，干扰少。

新鲜或冻存肝细胞悬浮液法：使用原代肝细胞，能更真实地反映体内完整的酶系统和细胞环境。

荧光底物检测法：采用可被特定CYP酶代谢产生荧光产物的探针底物，适用于高通量初筛，灵敏度高。

液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）法：通过LC-MS/MS定量检测探针底物代谢产物的生成量，是目前最准确、最通用的金标准方法。

发光底物检测法：使用化学发光或生物发光探针底物，具有灵敏度高、背景低、动态范围宽的优点。

Cocktail探针底物法：将多个针对不同CYP亚型的探针底物混合在同一孵育体系中，实现一次性同步评估对多种CYP酶的抑制。

时间依赖性抑制预孵育实验：先将待测化合物与酶源及辅因子预孵育一段时间，再加入探针底物，以鉴别时间依赖性抑制。

透析或稀释实验：用于区分可逆抑制与不可逆抑制，通过透析或大幅稀释来观察酶活性是否恢复。

基于表面等离子共振（SPR）的技术：一种无标记技术，实时监测化合物与CYP酶蛋白的直接结合动力学，用于机制研究。

检测仪器设备

液相色谱-串联质谱联用仪（LC-MS/MS）：用于精确分离和定量分析探针底物的代谢产物，是代谢抑制实验的核心定量设备。

多功能酶标仪：用于读取荧光、化学发光或吸光度信号，适用于基于光学信号的快速筛选实验。

恒温振荡培养箱：为肝微粒体或肝细胞与化合物的孵育反应提供恒定温度（通常37℃）和温和振荡的环境。

超高效液相色谱仪（UPLC）：与质谱联用，提供更快的分析速度和更高的色谱分离度。

高速冷冻离心机：用于孵育反应终止后沉淀蛋白或分离细胞碎片，以获取清澈的上清液进行后续分析。

自动液体处理工作站：实现孵育体系中试剂（微粒体、缓冲液、辅因子、底物、抑制剂）的高精度、高通量添加与分配。

-80°C超低温冰箱：用于长期保存肝微粒体、重组酶、原代肝细胞等珍贵生物样品，保持其酶活性稳定。

氮气吹干浓缩仪：在部分前处理流程中，用于快速浓缩或吹干样品溶液，以便复溶或进行衍生化。

pH计：精确配制和校准孵育反应所需的各种缓冲溶液，确保反应体系pH值的准确性。

生物安全柜：在处理原代肝细胞等具有生物潜在危害的材料时，提供无菌洁净的操作环境，保护人员和样品。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件