腺苷二磷酸核糖表观遗传学分析

检测项目

整体ADP-核糖基化水平检测：通过免疫印迹等方法，评估细胞或组织样本中总蛋白ADP-核糖基化修饰的总体丰度变化。

特定蛋白修饰位点鉴定：利用质谱技术，精确鉴定目标蛋白上发生ADP-核糖基化修饰的具体氨基酸残基（如天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸等）。

修饰链长与分支分析：区分单ADP-核糖基化与多聚ADP-核糖链修饰，并分析多聚链的长度、分支结构及复杂性。

PARP酶活性测定：定量分析聚ADP-核糖聚合酶（PARP）家族特定成员的催化活性，常用于药物筛选与功能研究。

染色质相关ADP-核糖基化图谱：研究组蛋白或染色质结合蛋白上的ADP-核糖基化修饰，揭示其在染色质重塑和基因表达调控中的作用。

DNA损伤位点共定位分析：检测ADP-核糖基化修饰与DNA双链断裂等损伤位点的空间共定位，阐明其在DNA损伤应答中的功能。

修饰动态变化监测：在时间序列上追踪特定刺激（如基因毒性应激）下，ADP-核糖基化修饰的发生、累积与清除动力学过程。

阅读蛋白识别分析：鉴定能够特异性识别并结合ADP-核糖基化修饰的“阅读器”蛋白，解析下游信号传导通路。

修饰与其它表观标记关联分析：探究ADP-核糖基化与甲基化、乙酰化等其它表观遗传修饰之间的交叉对话与相互调控关系。

疾病生物标志物开发：在癌症、神经退行性疾病等病理模型中，寻找异常的ADP-核糖基化修饰模式，作为潜在的诊断或预后标志物。

检测范围

核心组蛋白（H1, H2A, H2B, H3, H4）：分析组蛋白尾部或核心区域的ADP-核糖基化修饰，直接影响染色质结构和功能。

转录因子与共调节因子：检测参与基因转录调控的蛋白质上的修饰，研究其对转录活性的影响。

DNA损伤修复蛋白：涵盖PARP1自身修饰以及XRCC1、DNA连接酶III等修复因子，是DNA损伤应答的核心研究对象。

染色质重塑复合物组分：针对SWI/SNF等复合物成员，研究ADP-核糖基化如何调控其招募与活性。

细胞骨架蛋白：检测如肌动蛋白、微管蛋白等细胞骨架成分的修饰，探索其在细胞形态与迁移中的作用。

RNA结合蛋白与剪接因子：分析参与RNA代谢的蛋白质修饰，拓展其在转录后调控中的功能认知。

代谢酶类：涵盖糖酵解、三羧酸循环等关键代谢通路中的酶，连接表观遗传调控与细胞代谢状态。

病毒与细菌效应蛋白：研究病原体感染过程中，宿主或病原体自身蛋白的ADP-核糖基化在感染与免疫逃逸中的作用。

神经突触相关蛋白：在神经系统中，检测突触前后蛋白的修饰，研究与学习记忆或神经退行性病变的关联。

全蛋白质组尺度：不预设目标，对细胞或组织内所有可能的ADP-核糖基化修饰蛋白进行无偏性筛查与鉴定。

检测方法

免疫印迹（Western Blot）：使用针对单ADP-核糖或聚ADP-核糖链的特异性抗体，进行半定量检测，是最基础的验证方法。

免疫荧光/共聚焦显微镜：实现ADP-核糖基化修饰在细胞内的亚定位可视化，常用于观察DNA损伤灶处的PAR信号。

基于点击化学的标记与富集：利用PARP底物类似物（如炔烃标记的NAD+）进行代谢标记，通过点击化学反应连接生物素或荧光基团，实现高灵敏度检测与富集。

亲和纯化-质谱联用（AP-MS）：使用修饰特异性抗体或结合结构域（如PBZ结构域）富集修饰肽段/蛋白，随后进行质谱鉴定。

液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）：直接分析经酶解后的肽段混合物，通过母离子扫描或中性丢失扫描等模式，高通量鉴定修饰位点。

蛋白质微阵列技术：将大量纯化蛋白点制于芯片上，用于高通量筛选PARP酶的底物或修饰阅读器蛋白的结合靶标。

酶联免疫吸附测定（ELISA）：定量检测溶液或细胞裂解液中特定蛋白的ADP-核糖基化水平或PARP酶活性。

体外修饰反应体系：在纯化的重组蛋白、组蛋白或核小体上进行体外PARP酶催化反应，用于研究酶学特性及底物特异性。

基因编码的荧光生物传感器：将能够特异性结合ADP-核糖基化的结构域与荧光蛋白融合表达，实时、动态监测活细胞内修饰的变化。

新型测序技术应用

ChIP-seq/ChIP-MS变体：使用ADP-核糖基化特异性抗体进行染色质免疫共沉淀，结合测序或质谱，绘制全基因组范围内的修饰分布图谱。

检测仪器设备

高分辨率质谱仪（如Q-Exactive, Orbitrap系列）：提供高精度、高质量分辨率的肽段质量数据，是精确鉴定修饰位点的核心设备。

液相色谱系统（纳流/微流HPLC）：与质谱联用，用于复杂肽段混合物的高效分离，提高鉴定覆盖度与灵敏度。

化学发光成像系统：用于捕获免疫印迹实验中的化学发光信号，对ADP-核糖基化蛋白进行定量分析。

激光共聚焦显微镜：用于高分辨率、多通道的免疫荧光成像，精确观察ADP-核糖基化修饰的亚细胞共定位。

流式细胞仪：结合点击化学标记与荧光检测，实现对细胞群体中ADP-核糖基化水平的高通量、单细胞水平分析。

多功能酶标仪：用于进行ELISA、基于比色/荧光法的PARP活性检测等微孔板实验的吸光度或荧光强度读取。

蛋白质纯化系统（如FPLC）：用于纯化重组PARP酶、底物蛋白或阅读器蛋白，为体外生化分析提供高纯度材料。

超声波细胞破碎仪：用于制备均一的细胞或组织裂解液，确保后续免疫沉淀或富集步骤的效率。

芯片扫描仪：用于读取蛋白质微阵列实验的结果，高通量分析蛋白质相互作用或修饰事件。

下一代测序仪（如Illumina平台）：用于对ChIP-seq等实验获得的DNA文库进行高通量测序，解析全基因组水平的修饰分布。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件