免疫球蛋白稳定性测试

检测项目

外观与澄清度：目视或仪器检查样品是否出现浑浊、沉淀、变色或可见颗粒，是物理稳定性的初步判断。

pH值：监测溶液pH值的变化，评估制剂缓冲体系是否稳定，防止因pH偏移导致的蛋白质降解或聚集。

浓度与蛋白含量：通过紫外吸收或化学法测定，监控储存过程中是否发生蛋白吸附或降解导致的浓度变化。

纯度与杂质分析：评估产品相关杂质（如聚集体、片段）和工艺相关杂质（如宿主细胞蛋白）的水平变化。

聚集体与寡聚体分析：定量检测可溶性与不溶性聚集体，是评估物理稳定性的最关键指标之一。

片段化分析：检测重链、轻链或Fab/Fc区域的共价键断裂情况，反映化学降解稳定性。

电荷异质性：分析脱酰胺、氧化、糖型变化等引起的电荷变异体（如酸性/碱性峰）分布变化。

生物学活性：通过细胞学或生化方法测定其抗原结合或效应子功能，评估构象稳定性是否影响功能。

二级与三级结构：监测α螺旋、β折叠等二级结构及三级构象的变化，评估高级结构稳定性。

热稳定性（Tm值）：通过热变性实验测定熔解温度Tm，预测制剂的长期物理稳定性。

检测范围

单克隆抗体（mAb）：包括IgG1, IgG2, IgG4等多种亚型，是稳定性测试最主要的对象。

多克隆抗体：从免疫血清中提取的抗体混合物，需评估其整体稳定性。

抗体药物偶联物（ADC）：除抗体本身外，还需关注连接子与小分子毒素的稳定性及偶联比变化。

双特异性抗体：评估其复杂结构的构象稳定性以及不同结合臂的功能活性保持情况。

Fc融合蛋白：测试融合蛋白中免疫球蛋白Fc段与目标蛋白部分的整体稳定性。

抗体片段（Fab, scFv, VHH等）：缺乏Fc段的小分子抗体，需特别关注其聚集倾向和降解行为。

静脉注射用免疫球蛋白（IVIG）：作为血液制品，需严格监控其在不同条件下的稳定性以确保安全。

皮下/肌肉注射制剂：评估高浓度配方下的粘度、聚集及长期稳定性挑战。

冻干粉针剂：测试复溶前后的稳定性，以及冻干过程对蛋白结构的潜在影响。

临床前与临床样品：涵盖从早期研发、工艺开发到商业化生产各阶段的样品稳定性考察。

检测方法

尺寸排阻色谱（SEC-HPLC/UPLC）：基于流体力学体积分离，是定量分析可溶性聚集体和片段的首选方法。

离子交换色谱（IEX-HPLC）：根据电荷差异分离，用于精确分析脱酰胺、氧化等引起的电荷异质性。

反相色谱（RP-HPLC）：主要用于分析疏水性变化或小分子片段，如轻链和重链的分离。

毛细管电泳（CE-SDS）：在变性条件下高分辨率分离抗体片段和杂质，包括还原与非还原模式。

成像毛细管等电聚焦（icIEF）：高精度测定等电点（pI）和电荷异构体分布，灵敏度高。

动态光散射（DLS）：快速测定流体力学半径分布，用于早期筛选聚集和评估颗粒大小。

差示扫描量热法（DSC）：直接测量蛋白质的热变性温度（Tm），评估热稳定性与构象完整性。

圆二色谱（CD）：监测蛋白质二级结构（远紫外区）和三级结构（近紫外区）的变化。

荧光光谱法：利用内源荧光（色氨酸）或外源荧光染料探测蛋白质折叠/去折叠状态。

生物层干涉技术（BLI）/表面等离子共振（SPR）：实时、无标记地测定抗原结合动力学与亲和力，反映功能稳定性。

检测仪器设备

高效/超高效液相色谱系统（HPLC/UPLC）：配备多种检测器（UV， FLD），用于SEC， IEX， RP等色谱分析的核心设备。

毛细管电泳仪：实现CE-SDS， cIEF等高效分离，所需样品量少，自动化程度高。

动态光散射仪：用于快速测量蛋白质粒径分布与聚集趋势的便捷工具。

差示扫描量热仪：精确测量蛋白质溶液热力学参数，评估热稳定性的标准仪器。

圆二色谱仪：研究蛋白质溶液构象的专用光谱仪器，对结构变化敏感。

荧光光谱仪：用于测量蛋白质内源或外源荧光信号，探测微环境变化。

生物层干涉分析仪：实时、无标记分析分子互作动力学的仪器，用于活性测定。

稳定性试验箱：提供精确控制的温度、湿度及光照条件，用于长期和加速稳定性研究。

颗粒计数器与不溶性微粒分析仪：如光阻法或流式成像仪，用于定量分析亚可见和可见微粒。

pH计与电导率仪：基础但关键的设备，用于监控制剂溶液的理化参数稳定性。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件