蛋白质-小分子相互作用:定量测定药物候选化合物与靶蛋白的结合亲和力(KD值),是药物筛选的核心应用。
蛋白质-蛋白质相互作用:研究信号通路、复合物组装中蛋白间的结合强度与化学计量比,无需固定化。
蛋白质-核酸相互作用:分析转录因子、DNA/RNA结合蛋白与特定序列DNA或RNA的结合特性。
核酸-核酸相互作用:研究DNA-DNA杂交、RNA-RNA配对或核酸适配体与其靶标的结合。
抗体-抗原亲和力:精确测定单克隆抗体、纳米抗体等与抗原的表观解离常数,用于抗体表征。
离子结合分析:检测金属离子(如Mg2+、Ca2+)或其他离子与蛋白质/核酸的结合及其对构象的影响。
脂质体/膜蛋白相互作用:在接近天然膜环境的条件下,研究肽类、蛋白质与脂质体的结合。
酶动力学参数:通过底物或抑制剂结合实验,间接推导酶促反应的相关动力学常数。
竞争性结合实验:确定两种配体对同一结合位点的竞争关系,用于评估抑制剂效能。
化学计量比测定:通过结合饱和曲线分析,确定复合物中各组分的结合比例。
药物发现与筛选:从苗头化合物到先导化合物优化的各个阶段,进行高通量亲和力筛选与排序。
结构生物学研究:作为X射线晶体学和冷冻电镜的补充,验证并定量化观测到的分子互作界面。
表观遗传学:研究组蛋白修饰、阅读器蛋白与修饰化核酸或肽段的特异性识别。
疫苗研发:评估疫苗抗原与中和抗体或细胞受体的结合强度,指导抗原设计。
诊断标志物验证:确认潜在生物标志物与其检测探针(如适配体、抗体)的特异性结合能力。
基因调控研究:定量分析转录因子与启动子/增强子序列的亲和力,揭示调控机制。
蛋白工程与优化:对工程化抗体、酶或其它治疗蛋白进行亲和力成熟度的评估。
片段筛选:适用于弱亲和力(mM到μM级)的片段库筛选,发现新的结合位点。
生物制剂表征:在生物仿制药开发中,进行关键质量属性如亲和力的比对分析。
教学与基础科研:用于高校和中析研究所,作为研究生物分子互作的基础工具。
样品准备与标记:通常使用荧光染料对其中一种相互作用分子(通常是靶蛋白)进行共价或非共价标记。
浓度梯度设置:将固定浓度的荧光标记分子与一系列浓度梯度的未标记配体分子进行混合。
毛细管上样:将混合后的样品吸入特制的毛细管中,准备进行测量。
红外激光加热:在毛细管上施加一个精准定位的红外激光,产生一个微观的温度梯度(通常ΔT≈2-6°C)。
荧光信号监测:使用另一束激发激光和检测器,实时监测荧光分子在温度梯度场中的分布变化。
热泳动轨迹记录:记录加热前后荧光信号在毛细管中的分布曲线,得到热泳动(MST)轨迹。
数据归一化处理:将原始荧光信号归一化为Fhot/Fcold比值,以消除浓度差异和荧光波动的影响。
结合曲线拟合:将归一化的MST信号(ΔFnorm)对配体浓度作图,并用合适的结合模型(如1:1模型)进行拟合。
亲和力常数计算:通过拟合曲线直接计算出相互作用的解离常数(KD值)及其他参数。
对照实验设计:必须包含无配体对照、无标记分子对照等,以排除非特异性效应和染料干扰。
微量热泳动仪:核心设备,如Monolith系列,集成红外激光加热、荧光激发与检测系统。
高精度移液器:用于准确配制纳升级到微升级的样品与浓度梯度,确保实验精度。
荧光标记试剂盒:提供胺反应性、硫醇反应性等不同化学特性的荧光染料,用于标记蛋白或核酸。
专用毛细管:表面经亲水处理的玻璃毛细管,用于盛放样品并确保稳定的温度梯度形成。
台式离心机:用于离心样品管,去除气泡,确保样品均一性后再上样至毛细管。
分析软件:仪器配套的正规软件,用于控制实验、采集数据、拟合曲线和计算KD值。
样品缓冲液组件强健>: 包括标准缓冲液、添加剂(如还原剂、表面活性剂)以优化样品环境。
<强健恒温孵育器强健>: 用于样品在反应前后的恒温孵育,确保结合反应达到平衡。
<强健纯度分析仪强健>: 如HPLC或质谱,用于验证标记前后生物分子的纯度和完整性。
<强健超纯水系统强健>: 提供无污染的超纯水,用于配制所有缓冲液和样品,减少背景干扰。
1、咨询:提品资料(说明书、规格书等)
2、确认检测用途及项目要求
3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)
4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)
5、收到样品,安排费用后进行样品检测
6、检测出相关数据,编写报告草件,确认信息是否无误
7、确认完毕后出具报告正式件
8、寄送报告原件
第三方检测机构,国家高新技术企业,工程师科研团队,国内外先进仪器!