乙酰化修饰分析

检测项目

乙酰化位点鉴定：通过质谱分析，精确鉴定蛋白质上发生乙酰化修饰的特定赖氨酸残基位置。

乙酰化修饰定量分析：比较不同样本（如正常与疾病状态）中特定乙酰化位点的修饰丰度变化，进行相对或绝对定量。

全局乙酰化组学分析：大规模、无偏地鉴定和定量整个细胞或组织在特定条件下的所有乙酰化修饰事件。

组蛋白乙酰化谱分析：专注于组蛋白尾部特定赖氨酸位点（如H3K9、H3K27等）的乙酰化状态检测，用于表观遗传研究。

乙酰化修饰动力学研究：追踪乙酰化修饰水平随时间或处理条件变化的动态过程，揭示其调控速率。

乙酰转移酶/去乙酰化酶底物鉴定：鉴定特定乙酰转移酶（KAT）或去乙酰化酶（KDAC）的靶标蛋白及其修饰位点。

乙酰化修饰与其他修饰的交叉调控分析：研究乙酰化与磷酸化、甲基化等其他翻译后修饰之间的相互影响关系。

乙酰化修饰对蛋白质稳定性的影响：评估乙酰化修饰是否影响目标蛋白的降解速率和半衰期。

乙酰化修饰对蛋白质亚细胞定位的影响：检测乙酰化修饰是否改变蛋白质在细胞内的分布位置。

乙酰化修饰对蛋白质-蛋白质相互作用的影响：分析乙酰化修饰如何调控目标蛋白与其相互作用伙伴的结合能力。

检测范围

组蛋白：核心组蛋白（H2A, H2B, H3, H4）及其变体尾部赖氨酸的乙酰化修饰，是表观遗传调控的核心。

转录因子与调控蛋白：如p53、STAT3等，其乙酰化状态直接影响基因转录活性。

代谢酶：参与糖代谢、脂代谢、三羧酸循环等关键代谢途径的酶，其活性常受乙酰化精细调控。

细胞骨架蛋白：如α-微管蛋白的Lys40乙酰化，影响细胞形态、运动和细胞内运输。

分子伴侣：如热休克蛋白，其乙酰化可能影响其折叠辅助功能。

核孔复合体蛋白：参与核质运输的蛋白，其乙酰化修饰可能影响运输效率。

RNA结合蛋白：影响RNA的加工、稳定性和翻译过程。

DNA修复蛋白：参与DNA损伤应答的蛋白，其乙酰化状态影响修复效率。

信号转导通路蛋白：如激酶、磷酸酶等信号分子，其功能受乙酰化调控。

特定细胞器蛋白质组：针对线粒体、细胞核、内质网等细胞器内的蛋白质进行乙酰化修饰谱分析。

检测方法

免疫印迹（Western Blot）：使用特异性抗乙酰化赖氨酸抗体或位点特异性抗体，对目标蛋白进行半定量检测。

免疫共沉淀（Co-IP）结合质谱：利用乙酰化抗体富集修饰肽段或蛋白，随后进行质谱鉴定，用于发现性研究。

基于抗体芯片的检测：使用预先点制了多种抗体的芯片，高通量筛查样本中已知蛋白的乙酰化状态。

液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）：是乙酰化组学分析的黄金标准，能够实现大规模、高精度的位点鉴定与定量。

串联质谱标签（TMT/iTRAQ）标记定量：结合LC-MS/MS，对多组样本进行同步定量比较，提高通量和准确性。

稳定同位素标记（SILAC）细胞培养：在细胞水平进行代谢标记，结合质谱，实现高度准确的体内动态定量。

免疫亲和富集：在质谱分析前，使用泛乙酰化抗体对肽段进行高效富集，大幅提高低丰度修饰的检出率。

基于高分辨率质谱的数据依赖性采集（DDA）：常规发现蛋白质组学策略，用于无偏地采集质谱数据以鉴定修饰。

平行反应监测/选择反应监测（PRM/SRM）：靶向质谱方法，对已知的特定乙酰化位点进行高灵敏度、高重复性的绝对或相对定量。

基于质谱的绝对定量（AQUA）：使用合成的稳定同位素标记的乙酰化肽段作为内标，实现目标位点的绝对定量。

检测仪器设备

高分辨率液相色谱仪（HPLC/UPLC）：用于复杂肽段混合物的高效分离，是质谱前端的关键设备。

轨道阱系列质谱仪（Orbitrap）：如Q Exactive, Orbitrap Fusion系列，提供高分辨率、高质量精度和快速扫描速度，是修饰组学主流设备。

三重四极杆质谱仪（QQQ）：主要用于靶向定量分析（如PRM/SRM），具有极高的灵敏度和定量线性范围。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF/TOF）

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件