蛋白表达抑制测试

检测项目

目标蛋白丰度定量：通过测量特定目标蛋白在细胞或组织中的绝对或相对含量，直接评估抑制效果。

mRNA水平分析：检测编码目标蛋白的信使RNA（mRNA）的表达量，从转录层面评估抑制剂的干预效果。

蛋白质稳定性评估：考察抑制剂是否通过影响目标蛋白的降解速率（如泛素-蛋白酶体途径）来降低其表达。

蛋白质合成速率测定：利用代谢标记等方法，直接测量目标蛋白的新生合成速率，判断抑制是否发生在翻译环节。

蛋白质亚细胞定位观察：分析抑制处理后，目标蛋白在细胞内的分布变化，可能影响其功能。

蛋白质-蛋白质相互作用检测：评估抑制表达后，目标蛋白与其相互作用伙伴的结合能力是否发生改变。

信号通路活性分析：检测目标蛋白所在下游信号通路的关键分子磷酸化状态或报告基因活性，反映功能抑制。

细胞表型关联分析：将蛋白表达抑制与细胞增殖、凋亡、迁移等表型变化进行关联，验证功能后果。

抑制剂半数抑制浓度（IC50）测定：量化抑制剂在不同浓度下对目标蛋白表达的抑制效率，评估其效力。

脱靶效应筛查：检测抑制剂对非目标蛋白表达的影响，评估其特异性与潜在副作用。

检测范围

哺乳动物细胞系：包括HEK293、HeLa、CHO等多种常用贴壁和悬浮细胞系，是体外测试的主要对象。

原代细胞与干细胞：从组织分离的原代细胞或诱导多能干细胞，用于更接近生理状态的研究。

动物组织样本：从小鼠、大鼠等模式动物获取的经抑制剂处理的器官或肿瘤组织样本。

细菌与酵母表达系统：用于重组蛋白表达抑制测试或原核/真核模式生物的基础机制研究。

病毒载体转导的细胞：通过慢病毒、腺病毒等携带目标基因或报告基因的细胞，用于高通量筛选。

胞内可溶性蛋白：存在于细胞质、核质中的游离蛋白，是最常见的检测目标范围。

膜结合蛋白与受体：如GPCRs、离子通道、膜转运蛋白等，需要特殊的样品制备方法。

分泌型蛋白：如细胞因子、抗体、激素等，需收集细胞培养上清液进行检测。

磷酸化等翻译后修饰蛋白：针对特定修饰形式的蛋白表达抑制进行检测。

突变体或剪接变异体蛋白：针对基因特定突变或不同剪接体编码的蛋白亚型进行选择性抑制测试。

检测方法

蛋白质免疫印迹（Western Blot）：利用特异性抗体对目标蛋白进行定性及半定量分析的金标准方法。

酶联免疫吸附测定（ELISA）：基于抗原-抗体反应，对溶液中的目标蛋白进行高灵敏度的定量检测。

流式细胞术（Flow Cytometry）：对单细胞水平的目标蛋白进行快速、多参数的定量与分选。

免疫荧光/免疫组化（IF/IHC）：利用荧光或显色标记，在细胞或组织原位可视化观察蛋白表达与定位。

实时定量PCR（qRT-PCR）：通过检测mRNA水平的变化，间接但灵敏地反映蛋白表达抑制的转录调控。

蛋白质组学质谱分析：采用液相色谱-质谱联用技术，无偏性地全局分析蛋白质表达谱的变化。

表面等离子共振（SPR）：实时监测抑制剂分子与目标蛋白的结合动力学，间接推断表达或功能抑制。

报告基因检测法：将目标蛋白启动子或响应元件与荧光素酶等报告基因相连，间接反映转录调控活性。

邻近连接技术（PLA）：用于在原位高特异性地检测低丰度蛋白或蛋白质相互作用，灵敏度极高。

放射性氨基酸掺入法：使用放射性标记的氨基酸（如S35-甲硫氨酸）直接测量蛋白质的新生合成速率。

检测仪器设备

化学发光成像系统：用于捕获Western Blot、ELISA等实验中化学发光或荧光信号并进行成像分析。

酶标仪（微孔板阅读器）：用于读取ELISA、报告基因实验等在微孔板中产生的吸光度、荧光或化学发光信号。

流式细胞仪：实现对单个细胞的多参数蛋白表达快速分析与分选的核心设备。

共聚焦显微镜：用于高分辨率、三维的免疫荧光样本成像，精确分析蛋白亚细胞定位。

实时荧光定量PCR仪：进行qRT-PCR实验，精确定量特定mRNA转录本拷贝数的必备仪器。

液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）：进行深度蛋白质组学定量分析，发现差异表达蛋白的关键高端设备。

表面等离子共振仪（SPR）：用于实时、无标记地研究生物分子间相互作用动力学的高端生物物理设备。

蛋白电泳与转印系统：包括电泳槽、电源和湿转/半干转印仪，是完成Western Blot样品制备的基础设备。

细胞培养与处理设备：包括CO2培养箱、生物安全柜、离心机等，用于维持和处理测试所需的各类细胞样本。

自动化液体处理工作站：用于高通量筛选场景下，实现抑制剂添加、细胞接种、试剂分配等操作的自动化，提高通量与精度。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件