免疫亲和层析纯度检测

检测项目

目标蛋白纯度：评估经免疫亲和层析纯化后，目标蛋白在总蛋白中的质量百分比。

宿主细胞蛋白残留：检测纯化产物中残留的宿主细胞来源的杂蛋白含量。

核酸残留量：测定纯化样品中残留的DNA和RNA等核酸物质的含量。

内毒素水平：检测样品中细菌内毒素的含量，是生物制品安全性的关键指标。

抗体活性回收率：评估纯化过程前后，目标抗体生物活性的保留程度。

聚集体含量：分析目标蛋白是否形成二聚体或多聚体等高级结构。

蛋白浓度：精确测定纯化后目标蛋白的浓度，为后续制剂提供依据。

配体脱落：检测从亲和层析介质上可能脱落的配体分子（如Protein A）的残留量。

电荷异质性：分析目标蛋白因翻译后修饰（如脱酰胺）导致的电荷变体。

片段化分析：检测目标蛋白是否发生降解，产生非完整的片段。

检测范围

单克隆抗体：包括IgG、IgM等多种亚型的治疗性抗体的纯度与杂质分析。

重组融合蛋白：如受体-Fc融合蛋白等利用亲和标签（如His标签）纯化的产品。

疫苗抗原：通过特异性抗体纯化的病毒样颗粒或重组亚单位疫苗抗原。

血液制品：如凝血因子、血清白蛋白等血浆来源蛋白的纯化监测。

诊断用抗体：用于免疫检测的高纯度抗体原料的质量控制。

细胞因子与生长因子：如干扰素、白介素等具有生物活性的信号分子。

酶制剂：通过底物类似物或抑制剂作为配体纯化的各种酶类。

病毒载体：基因治疗中用到的腺相关病毒（AAV）等载体的纯化过程分析。

膜蛋白提取物：利用亲和层析初步富集和纯化的跨膜蛋白。

亲和标签蛋白：带有His、GST、MBP等标签的重组蛋白的纯化效果验证。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）：基于分子量分离蛋白质，通过染色评估纯度和片段化情况。

高效液相色谱（HPLC）：包括尺寸排阻色谱（SEC-HPLC）分析聚集体，反相色谱（RP-HPLC）分析疏水性差异。

酶联免疫吸附试验（ELISA）：高灵敏度定量检测宿主细胞蛋白、内毒素、配体脱落等特定杂质。

毛细管电泳（CE）：包括毛细管区带电泳（CZE）和毛细管等电聚焦（cIEF），用于分析电荷异质性和纯度。

紫外-可见分光光度法：快速测定蛋白浓度，并通过A260/A280比值初步判断核酸污染。

质谱分析（MS）：如LC-MS/MS，用于精确鉴定蛋白质身份、翻译后修饰及微量杂质。

动态光散射（DLS）：快速评估样品中蛋白质的流体力学半径和聚集状态。

表面等离子共振（SPR）：实时测定纯化后目标蛋白与配体的结合活性，评估活性回收率。

荧光染色法：使用SYPRO Ruby等荧光染料对SDS-PAGE胶进行高灵敏度染色，检测微量杂质。

鲎试剂法（LAL）：凝胶凝固法、浊度法或显色法，定量测定样品中的内毒素含量。

检测仪器设备

高效液相色谱仪（HPLC）：配备紫外、荧光或示差折光检测器，用于各种模式的色谱纯度分析。

毛细管电泳仪：用于高分辨率分离和分析蛋白质电荷变体及纯度。

全自动酶标仪：用于ELISA等微孔板检测方法的吸光度、荧光或化学发光信号读取。

紫外-可见分光光度计：用于蛋白质浓度的快速定量和核酸污染的初步筛查。

质谱仪：如三重四极杆或飞行时间质谱，与液相色谱联用进行深度杂质鉴定。

SDS-PAGE电泳系统：包括制胶装置、电泳槽和电源，用于常规蛋白纯度检查。

凝胶成像系统：用于对染色后的SDS-PAGE胶或Western blot膜进行图像采集和密度分析。

动态光散射仪：用于测量蛋白质溶液中的颗粒大小分布和聚集情况。

表面等离子共振仪（SPR）：实时、无标记地分析生物分子间的相互作用动力学和亲和力。

内毒素检测仪：专门用于读取鲎试剂试验结果的浊度或显色分析仪器。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件