环状神经激肽拮抗剂信号转导通路测试

检测项目

NK1受体结合亲和力测定：评估测试化合物与神经激肽1（NK1）受体的特异性结合能力，通常使用放射性配体竞争结合实验。

NK2受体结合亲和力测定：评估测试化合物与神经激肽2（NK2）受体的特异性结合能力，是确定拮抗剂选择性的关键。

NK3受体结合亲和力测定：评估测试化合物与神经激肽3（NK3）受体的结合特性，用于全面分析拮抗剂的受体谱。

细胞内钙离子流（Ca2+）动员检测：监测拮抗剂对神经激肽（如P物质）诱导的细胞内钙离子浓度升高的抑制效果。

肌醇磷酸（IP）积累测定：定量分析拮抗剂对NK受体激活下游的磷脂酶C（PLC）通路活性的抑制作用。

cAMP水平变化检测：评估拮抗剂对某些NK受体亚型偶联的腺苷酸环化酶（AC）活性及环磷酸腺苷（cAMP）产生的调节作用。

β-抑制蛋白（β-arrestin）募集测定：利用生物发光共振能量转移（BRET）等技术，检测拮抗剂对受体与β-抑制蛋白相互作用的影响。

ERK1/2磷酸化水平检测：通过蛋白质免疫印迹（Western Blot）或ELISA，测定拮抗剂对丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路关键分子ERK1/2磷酸化的抑制。

报告基因活性测定（如NF-κB或SRE）：构建含有特定反应元件的报告基因细胞系，量化拮抗剂对相关转录因子活性的调控。

受体内化与再循环动力学分析：利用荧光标记或抗体标记技术，观察拮抗剂作用下NK受体的内吞及膜再循环过程。

检测范围

重组人源NK受体过表达细胞系：如HEK293、CHO细胞稳定表达人NK1、NK2或NK3受体，用于高特异性信号研究。

原代感觉神经元培养物：从背根神经节（DRG）分离的神经元，用于在更生理相关的模型中验证拮抗剂效果。

中枢神经系统组织切片：如脑片或脊髓切片，用于在组织层面研究拮抗剂对神经通路的影响。

胃肠道平滑肌组织：NK受体在胃肠道动力调节中起关键作用，此模型用于评估拮抗剂对平滑肌收缩的抑制。

呼吸道平滑肌细胞：研究拮抗剂在哮喘或咳嗽等呼吸道疾病相关模型中的潜在疗效。

肿瘤细胞系：某些肿瘤细胞高表达NK受体，用于探索拮抗剂的抗肿瘤增殖或转移效应。

动物模型血浆与脑脊液样本：检测给予拮抗剂后，生物样本中内源性神经激肽水平的变化。

动物模型组织匀浆液：从处理过的动物模型中提取组织（如脑、脊髓、肠道），分析其中信号蛋白的磷酸化状态。

临床前药效学模型：如疼痛、呕吐、抑郁或膀胱过度活动症等动物模型，评估拮抗剂的整体生物学效应。

体外酶学检测体系：纯化的G蛋白亚型或激酶，用于分析拮抗剂对通路中特定酶活性的直接作用。

检测方法

放射性配体结合分析法：使用氚（3H）或碘-125（125I）标记的配体，通过过滤或闪烁亲近法测定受体结合率。

荧光成像钙离子测定法（FLIPR）：使用钙离子敏感性荧光染料（如Fluo-4），在微孔板读板机上实时监测细胞内钙瞬变。

均相时间分辨荧光（HTRF）IP-One检测：一种均相、免洗的检测方法，用于精确量化IP1（肌醇磷酸代谢物）的积累。

酶联免疫吸附测定法（ELISA）：用于定量检测细胞裂解物或组织匀浆中磷酸化ERK、cAMP等信号分子的含量。

蛋白质免疫印迹法（Western Blot）：半定量或定量分析信号通路中关键蛋白的表达及磷酸化水平。

生物发光共振能量转移（BRET）技术：实时、活细胞检测GPCR与β-抑制蛋白相互作用或二聚化的强大工具。

报告基因检测法：将荧光素酶或绿色荧光蛋白（GFP）报告基因转入细胞，通过检测发光或荧光强度反映通路活性。

流式细胞术：用于分析细胞表面受体表达水平的变化，或利用细胞内染色检测磷酸化信号蛋白。

免疫荧光染色与共聚焦显微镜成像：可视化观察受体在细胞内的定位、内化过程及与下游信号分子的共定位。

离体组织张力测定法：将胃肠道或呼吸道平滑肌条置于器官浴槽中，记录拮抗剂对神经激肽诱导收缩的抑制作用。

检测仪器设备

液体闪烁计数器或γ计数器：用于检测放射性配体结合实验中的放射性信号。

荧光显微成像系统或共聚焦显微镜：用于高分辨率观察细胞内的钙离子动态、蛋白定位等。

多功能微孔板读板机：具备荧光、发光、时间分辨荧光（TR-FRET/HTRF）及吸收光检测功能，用于各类均相检测。

实时细胞分析仪（如FLIPR Tetra）：专为快速、高通量监测细胞内钙流和膜电位变化而设计。

蛋白质免疫印迹系统：包括电泳仪、转膜仪和化学发光成像系统，用于Western Blot分析。

流式细胞仪：用于快速、多参数分析细胞群体中基于荧光的信号事件。

组织张力传感器与数据采集系统：用于记录离体平滑肌组织的等长或等张收缩力变化。

细胞培养与处理设备：包括CO2培养箱、生物安全柜、细胞计数仪等，用于维持检测所用细胞模型。

自动化液体处理工作站：提高加样精度和通量，适用于大规模化合物筛选的检测步骤。

数据分析与图像处理软件：如GraphPad Prism、ImageJ、FlowJo等，用于实验数据的统计分析与图像量化。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件