二脱氧核苷荧光定量分析

检测项目

DNA序列测定：利用荧光标记的ddNTPs在合成中随机掺入并终止链延伸，通过检测荧光信号确定DNA序列。

单核苷酸多态性分析：精确检测基因组中单个碱基的变异，用于遗传病研究和个体化医疗。

基因表达定量：通过定量检测cDNA合成过程中掺入的荧光ddNTPs，间接反映特定基因的mRNA表达水平。

病毒载量测定：定量检测病原体（如HIV、HJianCe）的特异性DNA序列，用于监控感染进程和治疗效果。

等位基因频率分析：在群体遗传学中，定量分析特定等位基因在样本中的分布频率。

DNA甲基化水平检测：结合重亚硫酸盐处理，通过掺入差异定量分析特定CpG位点的甲基化程度。

拷贝数变异分析：通过相对定量比较目标区域与参照基因的荧光掺入量，判断基因拷贝数的增加或缺失。

微生物群落定量：针对环境或肠道样本中特定微生物的标记基因进行定量，分析群落结构。

药物靶点基因突变检测：定量检测肿瘤相关基因的突变丰度，指导靶向药物的使用。

端粒长度定量：通过测量端粒重复序列的荧光掺入量，间接评估细胞端粒的长度。

检测范围

临床血液样本：适用于从全血、血清或血浆中提取的循环游离DNA或病原体DNA的定量分析。

组织与细胞样本：涵盖福尔马林固定石蜡包埋组织、新鲜冷冻组织以及培养细胞的基因组DNA。

微生物样本：包括细菌、病毒、真菌等微生物的纯培养物或混合样本中的特异性核酸。

法医物证样本：适用于微量、降解的DNA样本，如毛发、唾液斑、骨骼等的STR分型或SNP分析。

环境样本：用于土壤、水体、空气滤膜等环境样本中微生物功能基因的定性与定量。

植物基因组样本：适用于各类植物组织提取的DNA，用于品种鉴定、转基因检测等。

食品与农产品样本：检测食品中的转基因成分、过敏原基因或食源性致病微生物的污染。

考古与古生物样本：对古代骨骼、牙齿等材料中提取的痕量古DNA进行测序与定量研究。

药物研发样本：在细胞或动物模型上，检测药物处理前后特定基因表达或突变频率的变化。

产前诊断样本：适用于孕妇外周血中的胎儿游离DNA，进行非侵入性染色体异常筛查。

检测方法

Sanger测序法：经典方法，使用荧光ddNTPs和通用引物进行PCR扩增与链终止，通过毛细管电泳分离检测。

焦磷酸测序：通过检测ddNTPs掺入时释放的焦磷酸转化成的光信号，进行实时定量测序。

微测序法：又称引物延伸法，在特异性引物延伸中仅掺入单一荧光ddNTP，用于SNP分型或低丰度突变检测。

数字PCR定量法：将样本分割成数万个微反应单元，通过终点检测每个单元中荧光ddNTPs的掺入信号进行绝对定量。

多重PCR结合毛细管电泳：使用多组引物和不同荧光标记的ddNTPs，同时扩增多个靶标并进行分离定量。

芯片杂交延伸法：将寡核苷酸探针固定于芯片上，与靶序列杂交后进行引物延伸并掺入荧光ddNTPs，通过扫描定量。

液相色谱-质谱联用法：通过LC-MS/MS直接检测和定量酶反应产物中特定的二脱氧核苷单磷酸分子。

实时荧光监测法：在DNA聚合酶反应过程中，实时监测荧光标记ddNTPs掺入引起的信号变化，实现动力学定量。

单分子测序中的掺入监测：在基于合成测序的平台中，实时成像记录单个ddNTPs掺入事件产生的荧光信号。

终点荧光读数法：完成链延伸反应后，使用酶标仪或荧光计一次性读取反应体系的总荧光强度进行相对定量。

检测仪器设备

毛细管电泳仪：核心分离设备，如ABI系列遗传分析仪，用于分离不同长度的荧光标记DNA片段并检测信号。

实时荧光定量PCR仪：具备终点荧光检测功能，可用于掺入法基因表达定量或SNP分型分析。

数字PCR系统：如Bio-Rad QX200系统，提供高精度的绝对定量能力，尤其适用于低丰度靶标检测。

焦磷酸测序仪：专门用于焦磷酸测序技术的平台，能实时监测光信号进行序列测定。

高通量测序仪：如Illumina系列，其边合成边测序技术本质上是荧光标记dNTPs/ddNTPs的循环掺入与成像。

荧光显微成像系统：用于单分子测序或芯片扫描，高分辨率捕获掺入事件的荧光点信号。

多功能酶标仪：配备荧光检测模块，可对96孔或384孔板中的终点法反应进行高通量荧光强度读取。

液相色谱-串联质谱仪：用于直接对二脱氧核苷酸代谢物或反应产物进行高灵敏度、高特异性的定性与定量。

芯片扫描仪：专门用于读取基因芯片或微阵列上各探针位点的荧光信号强度。

核酸合成与测序工作站：自动化液体处理平台，整合了样本制备、PCR反应、纯化及上样等步骤，实现流程自动化。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件