肽图谱解析测试

检测项目

分子量测定：精确测定完整蛋白或酶切后肽段的分子量，是肽图谱鉴定的基础。

肽段序列确认：通过串联质谱（MS/MS）解析肽段的氨基酸序列，与理论序列进行比对。

二硫键定位：确定蛋白质中二硫键的连接位置，分析其正确的空间折叠结构。

翻译后修饰鉴定：鉴定如磷酸化、糖基化、乙酰化等修饰的类型和具体位点。

N/C端序列验证：确认蛋白质N端和C端的氨基酸序列，判断是否存在截短或变异。

肽图覆盖率分析：计算被鉴定肽段所覆盖的蛋白序列百分比，评估解析的完整性。

氨基酸取代与突变检测：发现序列中非预期的氨基酸替换、插入或缺失。

氧化与脱酰胺分析：定量分析蛋氨酸氧化、天冬酰胺脱酰胺等常见降解修饰。

糖型分析与糖基化位点鉴定：针对糖蛋白，分析其糖链组成、结构及连接的肽段位点。

蛋白纯度与杂质鉴定：通过肽图识别并定量样品中的工艺相关杂质或产品相关变体。

检测范围

单克隆抗体：包括全长抗体、抗体片段（如Fab、scFv）的全面表征与一致性评价。

重组治疗性蛋白：如细胞因子、激素、酶类等药物的肽图谱分析与质量控制。

生物类似药：与原研药进行头对头的肽图谱比对，以证明其结构相似性。

疫苗抗原：对重组蛋白疫苗、病毒样颗粒疫苗中的关键蛋白成分进行结构解析。

基因治疗载体蛋白衣壳：分析腺相关病毒（AAV）等载体衣壳蛋白的组成与修饰。

细胞与基因治疗产品：对工程化细胞分泌的蛋白或使用的修饰蛋白进行鉴定。

诊断试剂用蛋白：确保用于免疫检测的关键抗原/抗体试剂的结构正确性与批间一致性。

酶制剂：工业用或科研用酶的肽图谱分析，用于活性中心研究与稳定性评估。

食品与保健品中的活性蛋白：如乳清蛋白、胶原蛋白肽等产品的成分鉴定与真伪鉴别。

科研用蛋白样品：为基础研究中表达、纯化的任何目标蛋白提供结构确认服务。

检测方法

酶切消化法：使用胰蛋白酶、Lys-C等特异性蛋白酶将蛋白质切割成特征肽段混合物。

反相高效液相色谱法：基于肽段疏水性差异进行分离，是肽图谱分析最常用的分离手段。

液相色谱-质谱联用法：将LC的分离能力与MS的高灵敏度、高分辨率检测相结合，是核心方法。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法：用于快速测定肽段分子量及肽质量指纹图谱分析。

电喷雾电离质谱法：产生多电荷离子，特别适合与液相色谱联用进行复杂肽段混合物的分析。

串联质谱法：通过碰撞诱导解离等技术产生碎片离子，用于肽段序列解析。

高分辨率质谱法：如Orbitrap、FT-ICR MS，提供精确分子量用于元素组成分析和复杂修饰鉴定。

自上而下质谱法：直接对完整蛋白进行碎裂，获得更全面的序列和修饰信息，无需酶切。

肽图指纹图谱法：将实验获得的肽段质量列表与数据库理论酶切图谱比对，实现快速鉴定。

数据依赖性采集与数据非依赖性采集

DDA/DIA法：两种先进的质谱数据采集策略，用于实现更全面、可重现的肽段鉴定与定量。

检测仪器设备

高效液相色谱仪：用于肽段混合物的分离，常配备C18等反相色谱柱。

超高效液相色谱仪：使用更小粒径填料和更高压力，提供更快的分离速度和更高的分辨率。

三重四极杆质谱仪：适用于目标肽段的定量分析，具有高灵敏度和特异性。

四极杆-飞行时间质谱仪

Q-TOF MS：结合四极杆的质量过滤/选择能力和TOF的高分辨率质量分析能力，用于精确质量测定和序列分析。

轨道阱高分辨质谱仪

Orbitrap MS

：凭借其超高分辨率和质量精度，是复杂修饰鉴定和深度覆盖肽图分析的首选设备。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件