免疫原性ELISPOT分析

检测项目

干扰素-γ ELISPOT检测：最经典的项目，用于检测抗原特异性T细胞分泌IFN-γ的能力，是评估细胞免疫应答的黄金标准。

白细胞介素-2 ELISPOT检测：用于评估T细胞的增殖与记忆功能，IL-2的分泌是T细胞活化的重要标志。

白细胞介素-4 ELISPOT检测：主要用于检测Th2型免疫应答，在过敏性疾病和抗寄生虫免疫研究中应用广泛。

白细胞介素-17 ELISPOT检测：用于鉴定Th17细胞，在自身免疫性疾病和某些感染性疾病的发病机制研究中至关重要。

颗粒酶B ELISPOT检测：直接检测细胞毒性T淋巴细胞和NK细胞的杀伤功能，比细胞因子检测更能反映效应功能。

穿孔素ELISPOT检测：与颗粒酶B联用，全面评估CTL/NK细胞的溶细胞活性。

肿瘤坏死因子-α ELISPOT检测：用于检测促炎性细胞因子的分泌，评估炎症反应和免疫激活状态。

双色或多色荧光ELISPOT检测：可在单细胞水平同时检测两种或多种蛋白的分泌，用于分析细胞的功能亚群。

抗原特异性抗体分泌细胞ELISPOT检测：又称B细胞ELISPOT，用于检测和计数分泌特异性抗体的B细胞或浆细胞。

定制化细胞因子/趋化因子ELISPOT检测：根据研究需求，针对特定靶点（如IL-5, IL-10, IL-13等）建立定制化检测方案。

检测范围

疫苗免疫原性评价：评估新型疫苗（如病毒疫苗、肿瘤疫苗）诱导的抗原特异性T细胞及B细胞免疫应答的强度和广度。

肿瘤免疫治疗监测：监测过继性细胞治疗（如CAR-T, TCR-T）、免疫检查点抑制剂治疗后患者体内特异性T细胞的动态变化。

感染性疾病研究：研究病毒（HIV、HCV、CMV等）、细菌、寄生虫感染过程中特异性免疫应答的强度和持久性。

自身免疫病与过敏研究：检测针对自身抗原或过敏原的特异性T/B细胞反应，揭示疾病发生机制。

移植免疫学：评估移植受者对供体抗原的免疫反应，用于预测排斥风险或移植物抗宿主病。

免疫毒性评价：在药物安全评价中，检测药物对免疫系统功能的潜在抑制或异常激活作用。

基础免疫学研究：用于研究T/B细胞表位图谱、免疫记忆形成、淋巴细胞克隆功能等基础科学问题。

生物标志物发现：寻找与疾病预后或治疗反应相关的特异性免疫细胞频率，作为潜在的生物标志物。

免疫细胞功能验证：在体外验证经过基因改造或筛选的免疫细胞（如TCR-T细胞）的功能活性。

血液制品与免疫制剂质控：用于评估免疫球蛋白、干扰素等生物制品的活性或其中残留的淋巴细胞功能。

检测方法

PVDF膜板预处理：使用70%乙醇或35%酒精对96孔PVDF膜板进行短暂活化，以增强蛋白质结合能力。

包被抗体

捕获抗体包被：将针对目标细胞因子/蛋白的高亲和力、高特异性单克隆抗体稀释于无菌PBS中，加入孔内进行过夜孵育包被。