糖基化质量控制检测

检测项目

糖链组成分析：鉴定糖链中单糖的种类（如甘露糖、半乳糖、岩藻糖、唾液酸等）及其摩尔比例。

糖基化位点占有率：测定蛋白质上潜在N-连接或O-连接糖基化位点被实际糖基化的百分比。

N-糖谱分析：对蛋白质上所有N-连接糖链进行定性和相对定量分析，绘制完整的糖型图谱。

O-糖谱分析：对蛋白质上所有O-连接糖链进行定性和相对定量分析，揭示其修饰特征。

唾液酸化程度：定量分析糖链末端唾液酸残基的含量，与药物半衰期和免疫原性密切相关。

岩藻糖基化水平：测定核心岩藻糖的含量，影响抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ADCC）效应。

半乳糖基化水平：评估糖链末端半乳糖的含量，与补体依赖的细胞毒作用（CDC）相关。

高甘露糖型含量：测定高甘露糖型糖链的比例，影响蛋白质的清除速率和免疫反应。

糖链分支度（天线数）：分析复杂型N-糖链的分支情况（如双天线、三天线、四天线）。

电荷异质性分析：评估由唾液酸等带电糖基引起的蛋白质电荷变体分布。

检测范围

治疗性单克隆抗体：如IgG、IgM等，其Fc区和Fab区的糖基化直接影响药效和安全性。

融合蛋白：包含Fc融合蛋白等，其糖基化模式需进行严格监控。

重组治疗性蛋白：如促红细胞生成素（EPO）、凝血因子等，糖基化对其体内活性至关重要。

疫苗：包括重组蛋白疫苗和病毒样颗粒疫苗，糖基化影响其免疫原性和稳定性。

细胞表面受体与配体：研究其糖基化在细胞识别、信号传导中的作用。

血浆蛋白：如免疫球蛋白、转铁蛋白等，其天然糖基化谱是重要的生物标志物。

酶制剂：许多治疗用酶（如溶酶体酶）的糖基化影响其靶向性和稳定性。

病毒包膜蛋白：如HIV gp120、流感病毒血凝素，糖基化影响病毒侵染和免疫逃逸。

植物或昆虫表达系统生产的蛋白：其糖基化模式与哺乳动物系统存在差异，需特别关注。

生物类似药：与原研药进行全面的糖基化相似性比对，是质量评估的核心。

检测方法

液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）：高分辨率、高灵敏度的主流方法，可实现糖链组成、结构、位点的全面解析。

亲水作用液相色谱（HILIC）：常用于荧光标记后游离寡糖或完整糖肽的分离与分析。

毛细管电泳（CE）：基于电荷和大小分离，特别适用于唾液酸化糖型的精细分离和电荷异质性分析。

高效液相色谱（HPLC）：包括反相色谱、尺寸排阻色谱等，用于完整蛋白、糖肽或释放寡糖的分析。

酶解与化学释放法：使用PNGase F释放N-糖链，或通过β消除反应释放O-糖链，为后续分析做准备。

凝集素芯片/凝集素印迹：利用凝集素对特定糖结构的特异性结合，进行快速筛选和半定量分析。

核磁共振波谱（NMR）：提供糖链的立体化学结构和构象信息，是结构解析的“金标准”之一。

荧光标记与检测：常用2-AB、ProA等荧光染料标记释放的寡糖，极大提高HILIC或CE检测的灵敏度。

电泳与印迹技术：如SDS-PAGE结合Western blotting，使用凝集素或特异性抗体检测糖蛋白。

酶联免疫吸附试验（ELISA）：使用针对特定糖表位（如α-Gal、Neu5Gc）的抗体进行定量或定性检测。

检测仪器设备

高分辨率质谱仪（HRMS）：如Q-TOF、Orbitrap系列，提供精确质量数，用于糖链和糖肽的鉴定与序列分析。

三重四极杆质谱仪（QQQ-MS）：具备高灵敏度和特异性，适用于目标糖型的定量分析（MRM模式）。

超高效液相色谱仪（UHPLC）：提供高柱效和快速分离能力，与质谱联用实现高效分析。

毛细管电泳仪（CE）：配备紫外或激光诱导荧光检测器，用于高分辨率分离带电糖型。

荧光检测器：与HPLC或CE系统联用，检测荧光标记的寡糖，灵敏度极高。

多维液相色谱系统：通过两种以上不同分离机理的色谱联用，提升复杂样品的分离能力。

自动样品制备工作站：实现糖蛋白酶解、糖链释放、纯化、标记等步骤的自动化，提高重现性和通量。

凝集素芯片扫描仪：用于读取凝集素芯片上的荧光信号，实现高通量糖组学筛选。

核磁共振波谱仪（NMR）：高场NMR用于解析糖链的精细结构和构象。

酶标仪：用于读取基于ELISA或凝集素结合等方法的吸光度或荧光信号，进行定量分析。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件