荧光偏振相互作用测试

检测项目

蛋白质-小分子相互作用：定量测定药物候选化合物与靶蛋白（如激酶、受体）的结合亲和力（KD值）。

抗体-抗原结合：评估单克隆抗体或多克隆抗体与其特异性抗原的结合强度与动力学。

DNA/RNA-蛋白质相互作用：研究转录因子、核酸酶等蛋白与特定DNA序列或RNA结构的结合。

酶活性与抑制：通过检测底物或产物偏振光变化，实时监测酶促反应速率及抑制剂效果。

受体-配体结合：分析细胞表面受体（如GPCR）与其天然配体或合成配体的相互作用。

竞争结合实验：用于筛选能竞争性取代已知荧光标记配体的化合物，是药物筛选常用方法。

蛋白质-蛋白质相互作用：检测溶液中两个蛋白质分子是否发生结合形成复合物。

核酸杂交：通过荧光标记的探针检测互补DNA或RNA序列的存在与结合。

分子伴侣-底物识别：研究如热休克蛋白等分子伴侣与其未折叠蛋白底物的相互作用。

表观遗传学标记读取：分析组蛋白修饰阅读器蛋白（如Bromo域）与修饰组蛋白尾的结合。

检测范围

药物发现与高通量筛选：在96、384或1536孔板中快速筛选数千至数百万化合物库，寻找先导化合物。

临床诊断与免疫检测：用于均相免疫分析，检测血清中的药物浓度、激素水平或病原体抗体。

基础分子生物学研究：在溶液体系中定量研究各种生物大分子间的特异性相互作用。

食品安全监测：快速检测食品中的微量毒素（如黄曲霉毒素）、农药残留或抗生素。

环境污染物分析：检测水样或土壤提取物中的特定污染物，如多环芳烃、重金属离子螯合。

法医学鉴定：应用于DNA分型、唾液酒精浓度测定等快速现场检测。

细胞信号通路研究：通过检测第二信使（如cAMP）水平变化，研究GPCR下游信号激活。

生物工艺开发与质控：在线或离线监测生物反应器中产物浓度或关键生物分子相互作用。

伴随诊断开发：开发用于评估患者对特定靶向药物敏感性的体外诊断测试。

核酸适配体筛选：在SELEX技术中，用于筛选与靶标高亲和力结合的核酸适配体序列。

检测方法

直接结合法：将荧光标记的靶分子（如蛋白质）与不同浓度的未标记分析物混合，直接测量偏振值变化。

竞争结合法：固定浓度的荧光标记配体与靶标孵育，加入未标记竞争物，通过偏振值降低计算IC50。

终点法检测：反应达到平衡后进行一次性的荧光偏振测量，适用于稳态结合分析。

动力学实时监测：在微孔板阅读器中连续监测偏振值随时间的变化，获取结合/解离速率常数。

滴定实验：固定荧光探针浓度，逐步滴定加入结合伴侣，绘制结合曲线以计算亲和力参数。

位移实验：先形成荧光标记复合物，然后加入过量未标记竞争分子，观察偏振信号位移过程。

均相时间分辨荧光偏振：结合时间分辨荧光技术，使用长寿命镧系元素螯合物标记，降低背景干扰。

高通量筛选模式：使用自动化液体处理系统和多孔板阅读器，实现每分钟数百个样品的高速检测。

温度依赖性研究：在不同温度下进行FP实验，用于研究结合过程的热力学参数（ΔH， ΔS）。

缓冲液条件优化：系统改变pH、离子强度或添加去垢剂等条件，评估环境对相互作用的影响。

检测仪器设备

多功能微孔板阅读器：集成荧光偏振、荧光强度、发光等多种检测模式的高通量仪器，如PerkinElmer EnVision。

专用荧光偏振分析仪：专门为FP优化设计的仪器，通常具有高灵敏度和稳定性，如BMG LABTECH PHERAstar FS。

自动化液体处理工作站

Tecan Freedom EVO系列：用于自动完成试剂分配、样品稀释、板孔转移，确保实验重复性。

恒温孵育器/板式振荡器：确保反应在恒定温度下进行并充分混合，直至达到结合平衡。

黑壁透明底微孔板：最常用的耗材，黑色孔壁可减少孔间荧光串扰，透明底便于光路通过。

荧光标记试剂盒：提供经过优化的荧光染料（如FITC, TAMRA, Alexa Fluor系列）及其蛋白/核酸标记方案。

偏振滤光片组：仪器核心光学部件，包括激发偏振器和发射偏振器（通常为垂直和水平方向）。

高性能光电倍增管或CCD检测器

Hamamatsu PMT模块：用于将微弱的荧光信号转换为可测量的电信号，要求高信噪比。

数据分析软件：仪器配套软件，用于数据采集、曲线拟合（如四参数逻辑方程）、KD/IC50计算及图表生成。

样品制备与纯化系统

AKTA纯化系统：用于制备高纯度、用于标记的靶蛋白或核酸，是获得可靠FP数据的前提。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件