氧化代谢途径研究

检测项目

CYP450同工酶活性测定：通过检测特定探针底物的代谢速率，定量评估细胞色素P450家族中关键亚型（如CYP1A2, 2C9, 2D6, 3A4）的催化活性。

代谢稳定性评估：测定化合物在肝微粒体、肝细胞等孵育体系中的半衰期或剩余百分比，预测其在体内的代谢清除速率。

代谢产物鉴定与结构解析：利用高分辨质谱等技术，发现并确定原型化合物经氧化代谢后生成的主要及次要产物的化学结构。

反应表型研究：通过化学抑制剂、重组单酶或抗体抑制实验，确定负责化合物氧化代谢的主要CYP450酶。

酶促动力学参数测定：计算米氏常数（Km）、最大反应速率（Vmax）等，定量描述代谢酶与底物之间的相互作用强度与催化效率。

时间依赖性抑制评估：研究化合物是否经代谢活化后对CYP450酶产生不可逆或准不可逆抑制，评估其引起药物-药物相互作用的风险。

活性代谢中间体捕获：使用谷胱甘肽、氰化钾等亲核捕获剂， trapping并鉴定具有反应活性的代谢中间体，如环氧化物、醌类物质等。

代谢物定量分析：建立并验证LC-MS/MS等方法，对生物样本（血浆、尿液）中的原型药物及其主要氧化代谢物进行准确定量。

种属差异比较：比较同一化合物在不同物种（人、大鼠、犬等）肝微粒体或肝细胞中的代谢速率和产物谱，评估临床前数据的可外推性。

NADPH依赖性验证：通过设置不含辅因子NADPH的对照组，确认观察到的代谢反应是否依赖于经典的P450氧化还原系统。

检测范围

新化学实体：药物发现阶段的全新小分子化合物，评估其氧化代谢特性以优化结构、改善药代动力学性质。

候选药物：进入临床前开发的先导化合物，系统研究其氧化代谢途径，为IND申报提供数据支持。

已上市药物：对已上市药物进行深入的代谢再研究，阐明其个体差异、相互作用或毒性反应的代谢基础。

天然产物及活性成分：研究中草药或天然来源化合物在体内的氧化代谢命运，揭示其药效物质基础及潜在毒性。

环境污染物：研究多环芳烃、农药等外源性污染物在生物体内的氧化代谢活化或解毒过程。

内源性物质：如甾体激素、脂肪酸、维生素等，研究其通过CYP450等途径进行的生理性氧化代谢调控。

前药：研究前药分子经氧化代谢活化为有效治疗成分的效率与特异性。

手性药物对映体：分别研究手性药物的不同对映体在氧化代谢上的立体选择性差异。

药物代谢酶诱导剂/抑制剂：评估这些物质对肝脏氧化代谢酶系统表达或活性的影响。

来源于不同个体的肝组织样本：利用人肝微粒体库或肝细胞，研究遗传多态性导致的氧化代谢个体差异。

检测方法

肝微粒体温孵法：将待测物与肝微粒体、NADPH再生系统共孵育，是研究I相氧化代谢最经典的体外模型。

重组CYP450酶系法：使用表达单一人类CYP同工酶的重组微粒体或昆虫细胞，进行高特异性的酶反应表型分析。

肝细胞孵育法：采用原代肝细胞或肝细胞系（如HepaRG），在更完整的细胞环境中研究氧化代谢及后续结合反应。

肝切片培养法：保留肝脏组织结构与细胞间联系，用于研究区域性代谢及对组织毒性的评估。

Cocktail探针底物法：将多种CYP同工酶的特异性探针底物混合后与酶源共孵育，通过一次实验同步评估多种酶的活性。

液相色谱-质谱联用技术：LC-MS/MS或HRMS是分离、鉴定和定量代谢产物的核心技术手段，具有高灵敏度与高特异性。

放射性同位素示踪法：使用14C或3H标记的待测物，便于全面追踪其氧化代谢产物的分布与排泄路径。

荧光及化学发光检测法：基于特定探针底物代谢后产生荧光或发光信号，用于高通量筛选中的CYP酶活性测定。

核磁共振波谱法：NMR可用于直接鉴定复杂生物基质中代谢产物的结构，尤其适用于区分同分异构体。

体外-体内外推法：结合体外代谢数据和生理药代动力学模型，定量预测化合物在整体动物或人体内的氧化清除率。

检测仪器设备

三重四极杆液质联用仪：LC-MS/MS是进行代谢物定量分析的黄金标准设备，具备优异的灵敏度、选择性和通量。

高分辨质谱仪：如Q-TOF、Orbitrap等，能够提供代谢产物的精确分子量及碎片信息，是未知代谢物结构鉴定的关键工具。

高效液相色谱仪：HPLC与UV/PDA或荧光检测器联用，用于代谢产物的分离与初步定量分析。

超高效液相色谱仪：UPLC与质谱联用，可大幅提高分离度与分析速度，适用于复杂代谢产物的快速分析。

恒温振荡培养箱：为肝微粒体、肝细胞等体外温孵实验提供恒定温度（通常37℃）和均匀振荡的培养环境。

多功能酶标仪：配备荧光和化学发光检测模块，用于基于微孔板的高通量CYP450酶活性抑制或诱导筛选实验。

液体处理工作站：自动化完成温孵实验中的加样、混合、转移等步骤，提高实验精度与通量，减少人为误差。

氮吹浓缩仪：用于在质谱分析前，对生物样本提取液进行温和的浓缩与定容，以提高检测灵敏度。

-80℃超低温冰箱：用于长期稳定保存对温度敏感的试剂，如肝微粒体、重组酶、肝细胞及生物样本。

生物安全柜: 为操作原代肝细胞等生物材料提供无菌洁净环境，防止样本污染并保障操作人员安全。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件