反义硫代寡核苷酸酶耐受性实验

检测项目

血清稳定性检测：评估ASO在新鲜人或动物血清中随时间推移的完整性和降解情况。

血浆稳定性检测：测定ASO在全血浆环境中的耐受性，考虑血浆中所有酶和蛋白的综合影响。

核酸外切酶耐受性检测：专门检测ASO对从核酸链末端开始切割的核酸外切酶的抵抗能力。

核酸内切酶耐受性检测：评估ASO对在核酸链内部特定位点进行切割的核酸内切酶的稳定性。

肝匀浆液稳定性检测：模拟肝脏代谢环境，检测ASO在肝组织匀浆中的降解速率。

肾匀浆液稳定性检测：模拟肾脏代谢环境，评估ASO在肾组织匀浆中的酶解稳定性。

细胞裂解液稳定性检测：在目标细胞类型的裂解液中测试ASO的稳定性，反映细胞内酶环境的影响。

S1核酸酶耐受性检测：使用特异性单链核酸酶S1，检验ASO对单链特异性降解的抵抗能力。

脱氧核糖核酸酶I耐受性检测：评估ASO对经典DNA消化酶DNase I的切割作用的稳定性。

3‘-外切酶耐受性检测：针对性检测ASO对从3‘末端进行渐进式降解的外切酶（如蛇毒磷酸二酯酶）的耐受性。

检测范围

不同化学修饰的ASO：涵盖全硫代、部分硫代、不同硫代模式及与其他修饰（如2‘-MOE）联用的ASO序列。

不同序列长度的ASO：检测范围通常覆盖从12-mer到25-mer等不同长度的硫代寡核苷酸。

不同碱基组成的ASO：包含富含GC、富含AT或具有特定序列模体（如CpG岛）的各类ASO分子。

不同物种来源的生物基质：包括人、小鼠、大鼠、猴等多种实验动物及人的血清、血浆和组织匀浆。

不同生理病理状态的样本：可比较正常个体与疾病模型动物（如肝损伤模型）生物基质中ASO稳定性的差异。

不同浓度梯度的ASO：考察从纳摩尔到微摩尔浓度范围内，ASO浓度对其酶解稳定性的潜在影响。

不同孵育时间点：检测时间范围通常从0分钟到24小时或更长，以绘制完整的降解动力学曲线。

不同温度条件下的稳定性：评估在4°C、37°C（生理温度）等不同孵育温度下ASO的酶耐受性。

与辅料或递送系统结合后的ASO：检测与脂质体、纳米颗粒等递送系统结合后，ASO酶稳定性的变化。

代谢产物的鉴定与分析：不仅检测完整ASO，也涵盖对其降解产生的短片段或代谢产物的定性与定量分析。

检测方法

聚丙烯酰胺凝胶电泳法：通过变性或非变性PAGE分离完整ASO与降解片段，经染色后定性或半定量分析。

高效液相色谱法：使用反相或离子交换HPLC分离，通过紫外或荧光检测器定量分析ASO及其降解产物。

液相色谱-质谱联用法：结合LC的分离能力与MS的高灵敏度、高特异性，用于精确鉴定和定量ASO及其代谢物。

毛细管电泳法：利用CE的高分辨率分离ASO片段，激光诱导荧光检测可实现极高灵敏度分析。

荧光标记追踪法：在ASO末端标记荧光基团（如FAM），通过监测荧光信号的变化来间接反映降解程度。

放射性同位素标记法：使用32P或3H标记ASO，通过放射自显影或液闪计数进行高灵敏度定量分析。

杂交-酶联免疫吸附法：利用互补捕获探针和特异性抗体，通过ELISA原理定量检测未被降解的完整ASO。

实时荧光定量PCR间接检测法：将ASO与互补RNA杂交后，用RNase H切割RNA，通过qPCR定量剩余RNA来反推ASO完整性。

生物传感器检测法：利用表面等离子共振或石英晶体微天平等生物传感技术实时监测ASO与酶相互作用的动力学过程。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法：采用MALDI-TOF MS快速获得ASO的完整分子量信息，直观判断是否发生降解。

检测仪器设备

垂直电泳槽及电源：用于进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，分离不同长度的核酸片段。

高效液相色谱仪：核心分离分析设备，配备紫外检测器、二极管阵列检测器或荧光检测器。

三重四极杆液质联用仪：用于高灵敏度、高选择性的靶向定量分析及代谢产物鉴定。

高分辨率质谱仪：如飞行时间或轨道阱质谱，用于精确分子量测定和未知降解产物的结构解析。

毛细管电泳仪：配备紫外或激光诱导荧光检测器，用于高分辨率分离分析ASO样品。

多功能酶标仪：用于读取基于荧光、化学发光或吸光度的微孔板实验数据，实现高通量筛选。

实时荧光定量PCR仪：用于执行基于qPCR原理的间接稳定性检测方法。

生物分子相互作用分析系统：如SPR生物传感器，用于实时、无标记监测ASO与核酸酶的相互作用动力学。

恒温孵育振荡器：提供稳定且均匀的孵育环境（如37°C），用于样品与生物基质的共孵育。

超高效液相色谱仪：相比传统HPLC，具有更高分离度、更快速度和更灵敏度的分析能力。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件